Belangrijk verschil – HPLC versus HPTLC
Het belangrijkste verschil tussen HPLC en HPTLC is dat HPLC kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk maakt, terwijl HPTLC geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toestaat.
Chromatografie is een fysieke scheidingsmethode die wordt gebruikt om de componenten in een mengsel te scheiden en te identificeren. Zowel HPLC als HPTLC zijn chromatografische technieken. HPLC is hogedrukvloeistofchromatografie. HPTLC is hoogwaardige dunnelaagchromatografie.
Wat is HPLC?
HPLC is hoogwaardige vloeistofchromatografie. Het is een analytische techniek die wordt gebruikt om componenten in een mengsel te scheiden, identificeren en kwantificeren. Bij deze techniek wordt het monster opgelost in een geschikt oplosmiddel. Vervolgens wordt het oplosmiddel met het monster door een pomp met een bepaalde druk geleid. De pomp is gevuld met vast adsorberend materiaal. Dan binden sommige componenten sterk aan het absorberende materiaal, terwijl andere componenten losjes binden. Hierdoor hebben de componenten verschillende stroomsnelheden door de pomp. Daarom kunnen de componenten gemakkelijk worden gescheiden.
Figuur 01: Een HPLC-systeem
Het adsorberende materiaal dat de pomp vult, staat bekend als de stationaire fase. Het oplosmiddel met het opgeloste monster staat bekend als de mobiele fase. De pomp die bij deze techniek wordt gebruikt, wordt de kolom genoemd. De kolom is gevuld met een adsorberend materiaal, meestal silicadeeltjes. De grootte van deze deeltjes kan variëren van 2-50 m. Het scheidingsproces wordt beïnvloed door de samenstelling van de mobiele fase en de temperatuur van het systeem. De interacties tussen de stationaire fase en de component in het monster kunnen hydrofobe interacties, dipool-dipool interacties, ionbindingen, enz. zijn.
De werkdruk van de HPLC is aanzienlijk hoger dan die van de traditionele vloeistofchromatografie. Het ligt rond de 50-350 bar. Het verschil tussen vloeistofchromatografie en HPLC is dat bij vloeistofchromatografie het monster onder zwaartekracht door de kolom v alt, terwijl bij HPLC het monster door de kolom onder druk wordt gezet. De grootte van de kolom en de absorberende deeltjes zijn ook erg klein in vergelijking met de traditionele vloeistofchromatografie. De resolutie die wordt gegeven door de HPLC-techniek is echter superieur.
Wat is HPTLC?
HPTLC is hoogwaardige dunnelaagchromatografie. Het is de geavanceerde en geautomatiseerde vorm van traditionele TLC. Deze techniek zorgt voor een efficiënte oplossing in een korte tijdsperiode. Bij deze analysemethode kunnen het monster en een referentie tegelijkertijd worden geanalyseerd, waardoor het monster kan worden vergeleken met de referentie. Het geeft een verbeterde analytische nauwkeurigheid dan andere chromatografische technieken. De tijd die nodig is voor de analyse is korter. De techniek is een goedkope techniek.
Figuur 02: Een analyse van voedingskleurstoffen met HPTLC
De HPTLC-methode is een eenvoudig proces en de monstervoorbereidingsstap wordt ook geëlimineerd (in traditionele TLC wordt de monstervoorbereidingsstap voorafgaand aan de scheiding opgenomen. Deze stap omvat reiniging en verrijking). Het oplosmiddel kan direct worden gebruikt zonder enige voorbehandeling, hoewel andere chromatografische technieken voorbehandelingen vereisen, zoals ontgassing, filtratie, enz.
Het adsorberende materiaal dat in HPTLC wordt gebruikt, is silica met zeer kleine deeltjesgroottes. In traditionele TLC is de deeltjesgrootte van silica 5-20 m, terwijl dit in HPTLC 4-8 m is. Het monster wordt met een applicator op de HPTLC-plaat aangebracht. Het geeft een uniforme en veilige toepassing. Vervolgens worden de platen in een kamer met de mobiele fase geplaatst. De kamer moet verzadigd zijn met de damp van de mobiele fase. Na het HPTLC-proces kunnen de plekken die zijn verplaatst, worden gedetecteerd. Bij het detecteren van de vlekken op de plaat maakt de HPTLC-techniek gebruik van een geschikt UV-gebied of een jodiumkamer.
Wat is het verschil tussen HPLC en HPTLC?
HPLC versus HPTLC |
|
| HPLC is hoogwaardige vloeistofchromatografie. | HPTLC is hoogwaardige dunnelaagchromatografie. |
| Techniek | |
| In HPLC wordt de mobiele fase met het oplosmiddel door een kolom geleid die gevuld is met de stationaire fase. | In HPTLC wordt het monster gespot op een TLC-plaat en in een kamer geplaatst die de mobiele fase bevat; dan mag het monster samen met de mobiele fase naar boven op de plaat migreren. |
| Meting | |
| In HPLC worden de verschillen tussen stroomsnelheden van componenten door de kolom gebruikt om de componenten in het monster te scheiden. | In HPTLC worden de verschillen tussen de afstanden die door elke component in het monster worden afgelegd, gebruikt om de componenten in het monster te scheiden. |
| Kwantitatieve scheiding | |
| HPLC maakt kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk. | HPTLC staat geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toe. |
Samenvatting – HPLC versus HPTLC
HPLC en HPTLC zijn twee chromatografische technieken. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en HPTLC is dat HPLC kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk maakt, terwijl HPTLC geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toestaat.
