Het belangrijkste verschil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC een meer polaire mobiele fase en een minder polaire stationaire fase gebruikt. Terwijl HIC een hydrofobe stationaire fase gebruikt waardoor de hydrofobe moleculen eraan kunnen hechten.
Chromatografie is een analytische techniek die helpt om een mengsel in zijn componenten te scheiden. Eerst moeten we het te scheiden monster oplossen in een oplossing. Dit mengsel van oplossing en stof wordt de mobiele fase genoemd. Vervolgens wordt de mobiele fase door een ander materiaal geleid dat de stationaire fase wordt genoemd. De stationaire fase bepa alt de scheiding van de componenten. De scheiding vindt plaats door de verdeling van materiaal tussen de mobiele fase en de stationaire fase.
Wat is RP HPLC?
De term RP HPLC staat voor Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Het omvat de scheiding van componenten in een mengsel, volgens hydrofobiciteit. De hydrofobe componenten in de mobiele fase verbinden zich met de geïmmobiliseerde hydrofobe liganden op de stationaire fase, terwijl hydrofiele componenten door de stationaire fase elueren zonder gehecht te raken aan het oppervlak van de stationaire fase.
Figuur 01: HPLC-apparaat
Bovendien heeft deze methode meer reproduceerbaarheid in vergelijking met andere chromatografische technieken en is ze ook breed toepasbaar. Daarom gebruiken we deze methode in laboratoria voor meer dan 75% van alle HPLC-methoden. Meestal gebruiken we een waterig mengsel van water met een mengbaar polair organisch oplosmiddel als mobiele fase. Het zorgt dus voor de hechting van de hydrofobe componenten in de oplossing aan het oppervlak van de stationaire fase.
Wat is HIC?
De term HIC staat voor Hydrophobic Interaction Chromatography. Het is een soort omgekeerde fase HPLC en deze methode wordt voornamelijk gebruikt voor de scheiding van grote biomoleculen zoals eiwitten. Bij deze methode moeten we een waterig medium gebruiken om het monster van het biomolecuul te maken. Het is omdat organische oplosmiddelen denaturering van de eiwitten kunnen veroorzaken. Bovendien maakt deze techniek gebruik van de interactie tussen grote moleculen met een licht hydrofoob oppervlak van de stationaire fase. Bovendien moeten we een hoge zoutconcentratie in het monster gebruiken, omdat dit bevordert dat het eiwit op de verpakking wordt vastgehouden; dit proces wordt uitzouten genoemd. Door de zoutconcentratie geleidelijk te verlagen, kunnen we de biomoleculen afzonderlijk laten elueren op basis van hun hydrofobiciteit.
Meestal gebruikt deze methode de omstandigheden die tegengesteld zijn aan die van ionenuitwisselingschromatografie. Bij deze techniek moeten we eerst een bufferoplossing door de kolom leiden om de solvatatie van opgeloste stof in het monster te verminderen. Het maakt de hydrofobe gebieden van het eiwit bloot. Wanneer het molecuul echter meer hydrofoob is, is er minder zout nodig om de binding te bevorderen. Hier worden de minder hydrofobe opgeloste stoffen het eerst geëlueerd en volgens de verandering in de zoutconcentratie worden de meer hydrofobe opgeloste stoffen als laatste geëlueerd.
Wat is het verschil tussen RP HPLC en HIC?
Chromatografie is een analytische techniek voor het scheiden van componenten in een mengsel. RP HPLC en HIC zijn twee gespecialiseerde chromatografische technieken. Het belangrijkste verschil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC een meer polaire mobiele fase en minder polaire stationaire fase gebruikt, terwijl HIC een hydrofobe stationaire fase gebruikt, waardoor de hydrofobe moleculen eraan kunnen hechten.
De onderstaande infographic vat het verschil tussen RP HPLC en HIC samen.
Samenvatting – RP HPLC versus HIC
Chromatografie is een analytische techniek voor het scheiden van componenten in een mengsel. RP HPLC en HIC zijn twee gespecialiseerde chromatografische technieken. Het belangrijkste verschil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC een meer polaire mobiele fase en een minder polaire stationaire fase gebruikt, terwijl HIC een hydrofobe stationaire fase gebruikt, waardoor de hydrofobe moleculen eraan kunnen hechten.
