Het belangrijkste verschil tussen HPLC en snelle HPLC is dat de pompdruk die we gebruiken voor HPLC ongeveer 40 MPa is, terwijl de pompdruk voor snelle HPLC ongeveer 3-5 MPa is.
De meest gebruikelijke techniek die we gebruiken voor het scheiden van componenten van een mengsel is "vloeistofchromatografie". Er zijn verschillende technieken om dit doel te bereiken waarvan HPLC erg populair is. HPLC staat voor High Performance Liquid Chromatography die componenten van een vloeistofmengsel op een snelle en efficiënte manier identificeert, kwantificeert en scheidt. Fast HPLC is een speciale toepassing van HPLC die de laatste tijd de aandacht heeft getrokken van degenen die betrokken zijn bij de studie van oplossingen.
Wat is HPLC?
HPLC is hogedrukvloeistofchromatografie. Het maakt gebruik van een hoge druk om oplosmiddelen te duwen zodat ze door een kolom gaan. Het is ook een ideale manier om verschillende verbindingen zoals aminozuren, nucleïnezuren, koolhydraten, steroïden, antibiotica en koolwaterstoffen te scheiden en te bestuderen. HPLC heeft veel voordelen ten opzichte van andere methoden voor het scheiden van mengsels, zoals een hogere resolutie en snellere analyse. Het elimineert de noodzaak voor herverpakking en regeneratie en biedt een betere controle over parameters en verhoogt zo de efficiëntie van de scheiding. In het ideale geval is HPLC geschikt voor grootschalige toepassingen omdat het zeer kleine deeltjes kan scheiden en het gebruik van hoge drukken mogelijk maakt waardoor oplosmiddelen gemakkelijk kunnen stromen.
Figuur 01: HPLC-kolom
In het kort is de werkwijze van de HPLC-techniek als volgt. Eerst moeten we het monster met behulp van een pomp in discrete kleine hoeveelheden in de stroom mobiele fase introduceren. De pompdruk moet op 40 MPa worden gehouden. Deze stroom mobiele fase sijpelt door de kolom van HPLC. Vervolgens gaan de componenten in het monster ook door de kolom. Hun bewegingssnelheden verschillen echter van elkaar vanwege het verschil in de interacties tussen de monstercomponenten en het adsorbens in de kolom. We noemen dit adsorbens de stationaire fase omdat het zich in de kolom bevindt (niet beweegt). Vervolgens kunnen we aan het einde van de kolom het monster verzamelen dat uit de kolom elueert, waardoor we de componenten in het monster afzonderlijk kunnen verzamelen.
Wat is snelle HPLC?
Onlangs hebben onderzoekswetenschappers van het onderzoeksinstituut Schering Plough een snelle HPLC-techniek ontwikkeld die een geavanceerde versie van HPLC is, omdat deze een nog snellere scheiding van verbindingen uit een mengsel mogelijk maakt. Deze techniek, ook bekend als snelle HPLC, maakt gebruik van silicadeeltjes met een gesmolten kern van 2,7 um die worden gemaakt door poreuze silica van 0,5 um over een vast silicadeeltje te smelten. Deze uniek gemaakte deeltjes maken de scheidingsprocedure zeer snel en dat ook bij een lage tegendruk dan wat we gebruiken in HPLC.
Figuur 02: FPLC-apparaat
Snelle HPLC levert resultaten op die vergelijkbaar zijn met UPLC, maar wetenschappers zijn van mening dat deze techniek superieur is omdat er geen erg dure ultrahogedrukapparatuur voor nodig is. Het mooie is dat snelle HPLC geen nieuwe laboratoriumprotocollen vereist.
Wat is het verschil tussen HPLC en snelle HPLC?
HPLC is hoogwaardige vloeistofchromatografie en snelle HPLC is een geavanceerde vorm van hoogwaardige vloeistofchromatografie. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en snelle HPLC is dat de pompdruk die we gebruiken voor HPLC ongeveer 40 MPa is. Terwijl de pompdruk voor snelle HPLC ongeveer 3-5 MPa is. Verder kunnen we verschillende verbindingen zoals aminozuren, nucleïnezuren, koolhydraten, steroïden, antibiotica en koolwaterstoffen scheiden met behulp van de HPLC-techniek, terwijl de snelle HPLC-techniek voornamelijk wordt gebruikt voor de scheiding van eiwitten.
De onderstaande infographic geeft meer informatie over het verschil tussen HPLC en snelle HPLC.
Samenvatting – HPLC versus snelle HPLC
HPLC is een techniek van vloeistofchromatografie die over de hele wereld erg populair is geworden. Fast HPLC is een nieuwe versie van HPLC, onderzoekers van het Schering Plough Institute ontwikkelden deze nieuwe techniek. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en snelle HPLC ligt in de pompdruk die we gebruiken voor de scheiding. Dat is; de pompdruk die we gebruiken voor HPLC ligt rond de 40 MPa. Maar de pompdruk voor snelle HPLC is ongeveer 3-5 MPa.
