Het belangrijkste verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC is dat de omgekeerde fase HPLC een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase gebruikt, terwijl de normale fase HPLC een polaire stationaire fase en een minder polaire mobiele fase gebruikt.
De normale fase HPLC is de oudste techniek van HPLC die Tswett gebruikte bij zijn scheidingen van plantenextracten; hij gebruikte krijt in een glazen zuil. Dit was de klassieke modus van chromatografie die ertoe leidde dat het de "normale" techniek werd genoemd. Omgekeerde fase HPLC daarentegen is het tegenovergestelde van de normale techniek die wetenschappers de laatste tijd hebben ontwikkeld.
Wat is omgekeerde fase HPLC?
Reverse phase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofobe stationaire fase gebruiken. Van alle HPLC-methoden gebruiken we deze methode voor ongeveer 70% vanwege de brede toepasbaarheid en reproduceerbaarheid. De stationaire fase is niet-polair en de mobiele fase is polair.
Meestal gebruiken wetenschappers een waterig mengsel van water met een mengbaar, polair organisch oplosmiddel, zoals acetonitril of methanol als mobiele fase. Daarom interageren de analyten met de niet-polaire stationaire fase.
Wat is normale fase HPLC?
Normale fase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofiele stationaire fase gebruiken. Het is de traditionele methode van HPLC, hoewel we het niet zo veel gebruiken. De stationaire fase is polair en de mobiele fase is niet-polair. Wat nog belangrijker is, de mobiele fase van deze techniek is 100% biologisch. Dit betekent dat hiervoor geen water wordt gebruikt.
Figuur 01: Een monsterprofiel voor HPLC-chromatogrammen met normale fase en omgekeerde fase volgens de polariteit van componenten in de analyt.
Normaal gesproken bevat de stationaire fase silica, cyaan, diol, aminogebonden fasen, enz. Mobiele fasen omvatten organische oplosmiddelen zoals hexaan, ethylacetaat, enz. Deze techniek is gebaseerd op de retentie van oplosmiddel- of analytmoleculen op de polaire stationaire fase.
Wat is het verschil tussen HPLC met omgekeerde fase en normale fase?
Reverse phase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofobe stationaire fase gebruiken. De stationaire fase van deze techniek is niet-polair, terwijl de mobiele fase polair is. Bovendien gebruiken wetenschappers een waterig mengsel van water met een mengbaar, polair organisch oplosmiddel, zoals acetonitril of methanol als de mobiele fase in omgekeerde fase HPLC. Daarentegen is de normale fase HPLC een chromatografische techniek waarbij we een hydrofiele stationaire fase gebruiken. De stationaire fase van deze techniek is polair, terwijl de mobiele fase niet-polair is. Daarnaast gebruiken wetenschappers organische oplosmiddelen zoals hexaan, ethylacetaat, enz. als de mobiele fase van HPLC in de normale fase. De onderstaande infographic presenteert het verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC in tabelvorm.
Samenvatting – Omgekeerde fase versus normale fase HPLC
Reverse fase en normale fase HPLC-technieken zijn twee vloeistofchromatografische technieken. De belangrijk verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC is dat de omgekeerde fase HPLC een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase gebruikt, terwijl de normale fase HPLC een polaire stationaire fase en een minder polaire mobiele fase gebruikt.
