Het belangrijkste verschil FPLC en HPLC is dat FPLC een type vloeistofchromatografie is dat grote biomoleculen zoals eiwitten, nucleotiden en peptiden zuivert, terwijl HPLC een type vloeistofchromatografie is dat verbindingen met een klein molecuulgewicht scheidt.
Vloeistofchromatografie is een techniek die wordt gebruikt om een monster in zijn afzonderlijke componenten te scheiden. Deze scheiding vindt plaats door de interactie van specifieke monsters met mobiele en stationaire fasen. Componenten in een monster worden gescheiden op basis van de affiniteit van elke component voor de mobiele fase in vloeistofchromatografie. Terwijl de mobiele fase en het monster door een kolom gaan, beginnen de componenten van het monster te scheiden in banden die kunnen worden gedetecteerd door UV-VIS-spectroscopie. Daarom zijn FPLC en HPLC twee soorten vloeistofchromatografietechnieken.
Wat is FPLC?
FPLC is een soort vloeistofchromatografie die grote biomoleculen zoals eiwitten, nucleotiden en peptiden zuivert. De snelle eiwitvloeistofchromatografie (FPLC) werd voor het eerst ontwikkeld en op de markt gebracht in Zweden door het bedrijf Pharmacia in 1982. Het wordt vaak gebruikt om eiwitmengsels te analyseren of te zuiveren. Dit gebeurt op basis van het principe van affiniteiten van monstercomponenten voor bewegende vloeistof (mobiele fase) en een poreuze vaste stof (stationaire fase). In FPLC is de mobiele fase een buffer en is de stationaire fase een hars bestaande uit kralen. Het bestaat meestal uit verknoopte agarose verpakt in een cilindrische glazen of plastic kolom.
Figuur 01: FLPC-apparaat (Fast Protein Liquid Chromatography)
In de meeste FLPC-strategieën wordt ionenuitwisselingshars gebruikt. Daarom zal het van belang zijnde eiwit aan de hars binden door een ladingsinteractie. De FLPC-techniek maakt ook gebruik van twee buffers: buffer 1 (de loopbuffer) en buffer 2 (de elutiebuffer). Aanvankelijk, wanneer buffer en monstermengsel door de kolom lopen, zal het van belang zijnde eiwit in het mengsel door een ladingsinteractie aan de hars binden. Maar het eiwit van belang raakt gedissocieerd en keert terug naar de oplossing in elutiebuffer wanneer de elutiebuffer aan het einde van het proces door de kolom loopt. Later passeert de oplossing (elutiemiddel dat eiwit van belang bevat) twee detectoren, die de zoutconcentratie en de eiwitconcentratie meten. Omdat elk eiwit wordt geëlueerd, verschijnt het als een "piek" tijdens de detectie en kan het worden verzameld voor verder gebruik.
Wat is HPLC?
HPLC is een soort vloeistofchromatografie die verbindingen met een klein molecuulgewicht scheidt. In 1969 werd de eerste HPLC commercieel vervaardigd door Waters Corporation, VS. Bij high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) wordt een monstermengsel (analyt) in een oplosmiddel (mobiele fase) onder hoge druk door een kolom met chromatografisch pakkingsmateriaal (stationaire fase) gepompt. Het monstermengsel wordt gedragen door een bewegende draaggasstroom van helium of stikstof.
Figuur 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
De componenten in het monstermengsel die de minste interactie hebben met de stationaire fase of de meeste interactie met de mobiele fase zullen de kolom sneller verlaten. Aan de andere kant zullen de componenten in het monstermengsel die de meeste interactie hebben met de stationaire fase of de minste interactie met de mobiele fase de kolom langzamer verlaten. Op basis van het bovenstaande interactieprincipe kunnen de componenten van het monstermengsel worden gescheiden. Bovendien identificeert de instrumentdetector elke component van het monstermengsel dat de kolom verlaat. HPLC wordt gebruikt om milieu- en biologische monsters te inspecteren op de aan- of afwezigheid van bekende verbindingen, zoals medicijnen, toxines of pesticiden. Het wordt gebruikt in verschillende industrieën, zoals farmaceutica, milieu, forensisch onderzoek en chemicaliën.
Wat zijn de overeenkomsten tussen FPLC en HPLC?
- FPLC en HPLC zijn soorten vloeistofchromatografie.
- Beide worden gebruikt om biologische monsters te scheiden en te identificeren.
- Ze hebben een vloeibare mobiele fase en een vaste stationaire fase.
- Beide technieken gebruiken een kolom om door het monster te gaan.
- Deze technieken maken gebruik van pompen, detectoren, kleppen en software voor het scheiden en detecteren van monsters.
Wat is het verschil tussen FPLC en HPLC?
FPLC is een soort vloeistofchromatografie die wordt gebruikt om grote biomoleculen zoals eiwitten, nucleotiden en peptiden te zuiveren. HPLC is een type vloeistofchromatografie dat wordt gebruikt om verbindingen met een klein molecuulgewicht te scheiden. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen FPLC en HPLC. Bovendien gebruikt FPLC zowel pH- en geleidbaarheidsmonitors als fractiecollectoren. HPLC maakt daarentegen geen gebruik van pH- en geleidbaarheidsmonitors en fractiecollectoren.
De onderstaande infographic somt meer verschillen op tussen FPLC en HPLC in tabelvorm.
Samenvatting – FPLC versus HPLC
Chromatografie is een analytische laboratoriumtechniek die wordt gebruikt voor de scheiding van componenten uit een mengsel. Het is onderverdeeld in verschillende typen, zoals kolomchromatografie, gaschromatografie, vloeistofchromatografie, ionenuitwisselingschromatografie, enz. FPLC en HPLC zijn twee soorten vloeistofchromatografietechnieken. FPLC is een soort vloeistofchromatografie die wordt gebruikt om grote biomoleculen zoals eiwitten, nucleotiden en peptiden te zuiveren. Aan de andere kant is HPLC een type vloeistofchromatografie dat wordt gebruikt om verbindingen met een klein molecuulgewicht te scheiden. Dit is dus de samenvatting van wat het verschil is tussen FPLC en HPLC.
