Belangrijk verschil – SDS-pagina versus Western Blot
Western blotting is een techniek die een specifiek eiwit uit een eiwitmonster detecteert. Deze techniek wordt uitgevoerd via verschillende belangrijke stappen: gelelektroforese, blotting en hybridisatie. Natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-pagina) is een soort gelelektroforesetechniek die wordt gebruikt om eiwitten te scheiden op basis van hun grootte (molecuulgewicht). Western blot is een speciaal vel van een blotmembraan dat wordt gebruikt om hetzelfde patroon van de eiwitten in de SDS-pagina over te brengen. Het belangrijkste verschil tussen SDS Page en western blot is dat SDS Page de scheiding van eiwitten in een mengsel mogelijk maakt, terwijl western blot detectie en kwantificering van een specifiek eiwit uit een mengsel mogelijk maakt. Beide zijn nuttig bij eiwitanalyse-onderzoeken.
Wat is een SDS-pagina?
SDS Page is een gelelektroforesetechniek die wordt gebruikt voor eiwitscheiding. Het wordt vaak gebruikt in de biochemie, genetica, forensisch onderzoek en moleculaire biologie. Zodra de eiwitten uit het monster zijn geëxtraheerd, worden ze op een gel gelopen die bestaat uit SDS en polyacrylamide. SDS is een anionisch detergens dat wordt gebruikt om eiwitten te lineariseren (eiwitten denatureren) en om gelineariseerde eiwitten een negatieve lading te geven die evenredig is met hun molecuulmassa. Polyacrylamide wordt de vaste drager voor de gel. Gedenatureerde eiwitten die negatief geladen zijn migreren naar het positieve uiteinde van het apparaat door de gel. Afhankelijk van de grootte van de eiwitten, verschillen de migratiesnelheden tussen eiwitten en vindt scheiding plaats. Daarom is de SDS-pagina handig voor het scheiden van individuele eiwitten op basis van hun grootte.
De bereiding van de polyacrylamidegel voor de fractionering van eiwitten is een cruciale stap in SDS Page. De juiste concentratie van polyacrylamide en het type vernettingsmiddel dat wordt gebruikt, hebben een sterke invloed op de fysieke eigenschappen van de gel, waardoor de daadwerkelijke scheiding van de verschillende eiwitten mogelijk is. De poriegroottes van de gel moeten goed worden beheerd voor een effectieve scheiding. SDS Page wordt echter beschouwd als een techniek voor het scheiden van eiwitten met een hoge resolutie.
SDS Page-techniek heeft een grote beperking in eiwitanalyse. Aangezien SDS eiwitten denatureert voorafgaand aan scheiding, is het niet mogelijk om enzymatische activiteit, eiwitbindingsinteracties, eiwitcofactoren, enz. te detecteren.
Figuur 01: SDS-pagina
Wat is Western Blot?
Western blotting-techniek maakt het mogelijk een specifiek eiwit uit een eiwitmengsel te detecteren en de hoeveelheid en het molecuulgewicht van het eiwit te meten. Western blot is het membraan dat tijdens de blotprocedure wordt gebruikt om het spiegelbeeld van de eiwitpatronen in de SDS-polyacrylamidegel te krijgen. Het membraan dat voor western blotting wordt gebruikt, bestaat meestal uit nitrocellulose of polyvinylideendifluoride (PVDF). Het membraan met het overgebrachte eiwit kan worden gebruikt om het gewenste eiwit te identificeren. Het vereist antilichaam van hoge kwaliteit voor de detectie van het gewenste eiwit door hybridisatie. Het antilichaam bindt aan zijn specifieke antigeen en onthult de aanwezigheid van het gewenste antigeen dat een eiwit is.
Overdracht van de eiwitten van de SDS-polyacrylamidegel naar de western blot wordt uitgevoerd door elektroblotting. Het is een effectieve en snelle methode die ervoor zorgt dat de eiwitten uit de gel elektroforese worden en op het nitrocellulosemembraan terechtkomen (western blot).
Figuur 02: Western Blot
Wat is het verschil tussen SDS-pagina en Western Blot?
SDS-pagina versus Western Blot |
|
| SDS Page is een gelelektroforesetechniek. | Western blot is een techniek die op een membraan wordt uitgevoerd om een specifiek eiwit uit een mengsel te detecteren. |
| Gebruik | |
| SDS-pagina maakt scheiding van eiwitten mogelijk op basis van hun grootte. | Western blot maakt de overdracht van eiwitten op de SDS-paginagel mogelijk zonder het patroon te veranderen en maakt hybridisatie met specifieke antilichamen mogelijk. |
| Nadelen | |
| Eiwitdenaturatie, hoge kosten en aanwezigheid van neurotoxinechemicaliën zijn de nadelen van deze techniek. | Deze techniek is tijdrovend en vereist een goed ervaren persoonlijke en specifieke gecontroleerde omstandigheden. |
Samenvatting – SDS-pagina versus Western Blot
SDS-pagina en western blot zijn twee methoden die betrokken zijn bij eiwitanalyse. SDS Page maakt een gemakkelijke scheiding van eiwitten op een gel mogelijk op basis van hun molecuulgewicht. Western blot helpt de aanwezigheid en hoeveelheid van een specifiek eiwit te bevestigen door hybridisatie met specifieke antilichamen. Dit is het verschil tussen SDS-pagina en western blot.
