Het belangrijkste verschil tussen HPLC en UPLC is dat de HPLC de analyse mogelijk maakt van deeltjes met een grootte van ongeveer 5 micrometer, terwijl UPLC veel kleinere deeltjes van ongeveer 2 micrometer toelaat.
HPLC en UPLC zijn beide vloeistofchromatografische technieken die nuttig zijn bij het scheiden van de componenten van een verbinding. Om het verschil tussen HPLC en UPLC te kennen, moeten we eerst weten wat HPLC is. Dit komt omdat UPLC een speciale versie van HPLC is en we het gemakkelijk kunnen begrijpen als we weten wat HPLC is.
Wat is HPLC?
De term HPLC staat voor High Performance Liquid Chromatography. Het is een techniek die we kunnen gebruiken om verschillende bestanddelen van een verbinding te scheiden. Het is ook de meest gebruikte techniek om componenten van een mengsel te identificeren, kwantificeren en scheiden. Bovendien gebruikt deze techniek een hoge druk om oplosmiddelen door de kolom te duwen. Bovendien liggen de belangrijkste toepassingen van HPLC in de biochemie voor de analyse van bestanddelen van een verbinding. Het is een ideale manier voor het scheiden en identificeren van aminozuren, nucleïnezuren, eiwitten, koolwaterstoffen, pesticiden, koolhydraten, antibiotica, steroïden en talloze andere anorganische stoffen.
Figuur 01: HPLC-systeem in een laboratorium
In het kort is de werkwijze van de HPLC-techniek als volgt. Ten eerste moeten we het monster met behulp van een pomp in discrete kleine hoeveelheden in de stroom mobiele fase brengen. De pompdruk moet op 40 MPa worden gehouden. Vervolgens sijpelt deze stroom mobiele fase door de HPLC-kolom. Ook gaan de componenten in het monster door de kolom. Hun bewegingssnelheden verschillen echter van elkaar. Dit verschil ontstaat door het verschil in de interacties tussen de monstercomponenten en het adsorbens in de kolom. We noemen dit adsorbens de stationaire fase omdat het zich in de kolom bevindt (niet beweegt). Ten tweede kunnen we aan het einde van de kolom het monster verzamelen dat uit de kolom elueert. Daar kunnen we de verschillen in retentietijden voor elk onderdeel in de steekproef bepalen.
Wat is UPLC?
De term UPLC staat voor Ultra High-Performance Liquid Chromatography. Het is een variant van HPLC, maar de werkwijze is hetzelfde. In tegenstelling tot HPLC kunnen met deze methode echter zeer kleine deeltjes worden geanalyseerd, zoals 2 micrometer kleine deeltjes.
Figuur 02: Een UPLC-apparaat
Bovendien biedt het een snellere analyse. Bij deze techniek gebruiken we een pompdruk van 100 MPa voor het inbrengen van het monster in de kolom. Deze hoge druk bevestigt dus dat het hele monster in de kolom wordt gebracht. Dit is dus zeer efficiënt in vergelijking met HPLC.
Wat is het verschil tussen HPLC en UPLC?
De term HPLC staat voor High Performance Liquid Chromatography, terwijl de term UPLC staat voor Ultra High Performance Liquid Chromatography. Daarom is de UPLC-techniek een ontwikkelde versie van HPLC. De werkwijze is dus voor beide technieken hetzelfde. UPLC is echter efficiënter in vergelijking met HPLC omdat het een hoge pompdruk gebruikt; de pompdruk voor HPLC is 40 MPA, terwijl deze voor UPLC 100 MPa is. Daarom is dit een verschil tussen HPLC en UPLC. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en UPLC is vooral dat de HPLC de analyse mogelijk maakt van deeltjes met een grootte van ongeveer 5 micrometer, terwijl UPLC veel kleinere deeltjes van ongeveer 2 micrometer toelaat.
Samenvatting – HPLC versus UPLC
UPLC is een vorm van HPLC. De bedieningsmethoden zijn dus hetzelfde. Maar we kunnen enkele verbeterde functies vinden in UPLC in vergelijking met HPLC. Daarom is er enig verschil tussen HPLC en UPLC. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en UPLC is echter dat de HPLC de analyse mogelijk maakt van deeltjes met een grootte van ongeveer 5 micrometer, terwijl de UPLC veel kleinere deeltjes van ongeveer 2 micrometer toelaat.
