Belangrijk verschil - Immunofluorescentie versus immunohistochemie
Ziektediagnostiek, waarbij gebruik wordt gemaakt van moleculair biologische methoden, is een opkomend gebied van de klinische laboratoriumtechnologie geworden. Het omvat alle tests en methoden om een ziekte te identificeren en de oorzaak van een ziekte te begrijpen door DNA, RNA of tot expressie gebrachte eiwitten in een organisme te analyseren. Snelle vorderingen in de moleculaire diagnostiek hebben fundamenteel onderzoek naar overdraagbare en niet-overdraagbare ziekten mogelijk gemaakt. Deze worden gebruikt om veranderingen in sequentie of expressieniveaus te bepalen in cruciale genen of eiwitten die betrokken zijn bij ziekte. Immunofluorescentie (IF) en Immunohistochemie (IHC) zijn twee van dergelijke veelgebruikte technieken in de kankerbiologie. IF is een type IHC waarbij een fluorescentiedetectiemethode wordt gebruikt om monoklonale en polyklonale antilichamen te analyseren, terwijl IHC op chemicaliën gebaseerde methoden gebruikt om de monoklonale en polyklonale antilichamen te detecteren. Dit is het belangrijkste verschil tussen IF en IHC.
Wat is immunofluorescentie (IF)?
Immunofluorescentie is een detectietechniek waarbij de antilichamen die in de test worden gebruikt, voor het detectiedoel worden gelabeld met fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende eiwitten. Gelabelde secundaire antilichamen kunnen leiden tot ongewenste achtergrondsignalen; daarom is de IF-techniek momenteel gebaseerd op het labelen van het primaire antilichaam zelf om ongewenste signalen tijdens detectie te voorkomen. Door deze techniek wordt niet-specifieke binding tussen het primaire en het secundaire antilichaam voorkomen, en het is sneller omdat er geen secundaire incubatiestap bij betrokken is. De gegevenskwaliteit is ook verbeterd.
Figuur 01: Dubbele immunofluorescentiekleuring voor BrdU, NeuN en GFAP
Fluorchromen of fluorescerende kleurstoffen zijn verbindingen die straling kunnen absorberen, bij voorkeur ultraviolette straling die wordt geëxciteerd. Wanneer de deeltjes de grondtoestand bereiken vanuit de aangeslagen toestand, zenden ze straling uit die wordt opgevangen en gedetecteerd door een detector om een spectrum te vormen. Het is van groot belang dat het fluorescerende label compatibel en stabiel is voor de specifieke reactie en dat het correct aan het antilichaam moet worden geconjugeerd om nauwkeurige resultaten te verkrijgen. Een van de meest gebruikte fluorochromen is fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC), dat een groene kleur heeft, met absorptie- en emissiepiekgolflengten van respectievelijk 490 nm en 520 nm. Rhodamine, een ander middel dat in IF wordt gebruikt, is rood van kleur en heeft duidelijke absorptie- en emissiepiekgolflengten van 553 nm en 627 nm.
Wat is immunohistochemie (IHC)?
IHC is een moleculaire testmethode die wordt toegepast om de aanwezigheid van het antigeen in de doelcel te identificeren en te bevestigen. De doelcel kan een infectieus deeltje, een microbieel pathogeen of een kwaadaardige tumorcel zijn. IHC gebruikt monoklonale en polyklonale antilichamen om de aanwezigheid van antigenen op het celoppervlak van de doelcellen te bepalen. De techniek is gebaseerd op antigeen-antilichaambinding. Aan deze antilichamen wordt een detectiemarker geconjugeerd om de aan- of afwezigheid van het specifieke antigeen te detecteren. Deze markers kunnen chemische markers zijn, zoals enzymen, fluorescent gelabelde antilichamen of radiogelabelde antilichamen.
Figuur 02: Muis-hersenschijf gekleurd door immunohistochemie
De meest populaire toepassing van IHC is in de kankercelbiologie om de aanwezigheid van kwaadaardige tumoren te identificeren, maar het wordt ook gebruikt voor de detectie van infectieziekten.
Wat zijn de overeenkomsten tussen immunofluorescentie en immunohistochemie?
- Immunofluorescentie en immunohistochemie vinden plaats onder in vitro omstandigheden.
- Beide technieken zijn gebaseerd op het antigeen-antilichaam
- Beide zijn zeer snelle technieken.
- Resultaten van de technieken zijn reproduceerbaar.
- Beide hebben een verbeterde gegevenskwaliteit.
- Deze technieken worden gebruikt bij de diagnostiek van kanker en infectieziekten.
Wat is het verschil tussen immunofluorescentie en immunohistochemie?
Immunofluorescentie versus immunohistochemie |
|
| IF is een detectietechniek waarbij de antilichamen die in de test worden gebruikt, worden gelabeld met behulp van fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende eiwitten voor detectie. | IHC is een detectietechniek waarbij de antilichamen die in de test worden gebruikt, worden gelabeld met chemicaliën of radioactieve elementen voor detectie. |
| Nauwkeurigheid | |
| Nauwkeurigheid is hoger in IF-techniek in vergelijking met IHC. | Nauwkeurigheid is lager in IHC. |
| Specificiteit | |
| IF is specifieker. | IHC is minder specifiek. |
Samenvatting – Immunofluorescentie versus immunohistochemie
Moleculaire mechanismen hebben veel veranderingen teweeggebracht op het gebied van geneeskunde, wat heeft geleid tot geavanceerde moleculaire testmethoden die hebben geleid tot revoluties op het gebied van diagnostiek. Deze uitvindingen hebben geleid tot een snelle en nauwkeurige identificatie en bevestiging van de ziekte, waardoor de succesvolle toediening en productie van medicijnen mogelijk is. Deze technieken worden ook in de farmacologie gebruikt om de doelwitten van geneesmiddelen te vinden en om de farmacokinetische eigenschappen van het geneesmiddel tijdens het metabolisme van geneesmiddelen te bevestigen. IF en IHC zijn twee diagnostische methoden die zijn gebaseerd op het concept van antigeen- en antilichaambinding, hoewel de detectiemethode in beide technieken verschilt. IF gebruikt het principe van fluorescentie om het antigeen te detecteren en IHC gebruikt het concept van chemische conjugatie om het antigeen te detecteren. Dit is het verschil tussen IF en IHC.
Download PDF-versie van immunofluorescentie versus immunohistochemie
U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden volgens de citatienota. Download hier de PDF-versie. Verschil tussen immunofluorescentie en immunohistochemie.
