Belangrijk verschil - In situ hybridisatie versus immunohistochemie
Diagnostiek van kanker en infectieziekten is een populaire trend waarbij nieuwe op proteomics en genomica gebaseerde technieken worden gebruikt voor het identificeren van tumoren of infectieuze cellen, de proliferatie ervan en de plaatsen van celontwikkeling en het analyseren van de genetische basis van de meest overdraagbare en niet-overdraagbare ziekten. Dit zal resulteren in een nauwkeurige verwerking en ontwerp van geneesmiddelen en in het ontwikkelen van op maat gemaakte therapieën voor ziekten. In situ hybridisatie (ISH) en immunohistochemie (IHC) zijn twee van dergelijke veelgebruikte technieken in de kankerbiologie en het belangrijkste verschil tussen in situ hybridisatie en immunochemie ligt in de moleculen die in de analyseprocedure worden gebruikt. In ISH worden de nucleïnezuurprobes gebruikt in analyse, terwijl in IHC monoklonale en polyklonale antilichamen worden gebruikt voor de diagnostische bepalingen.
Wat is in-situ hybridisatie (ISH)?
In situ hybridisatie is een nucleïnezuurhybridisatietechniek die direct wordt uitgevoerd op een deel of sectie van weefsel, in het gehele weefsel of in cellen. De techniek is afhankelijk van de theorie van complementaire basenparing van Watson Crick, wat resulteert in DNA-DNA-hybriden of DNA-RNA-hybriden die gemuteerde genen kunnen detecteren of het vereiste gen van belang kunnen identificeren. Enkelstrengs DNA-sequenties, dubbelstrengs DNA-sequenties, enkelstrengs RNA-sequenties of synthetische oligonucleotidesequenties worden gebruikt als sondes tijdens hybridisatietechniek, en deze sondes zijn gelabeld met een radioactief fosfor aan het 5'-uiteinde voor identificatieprocedures na autoradiografie of gelabeld met behulp van fluorescerende kleurstoffen. Er zijn verschillende soorten ISH-technieken beschikbaar op basis van het type sonde dat wordt gebruikt en het type visualisatietechniek dat wordt gevolgd.
Figuur 01: Fluorescerende in situ hybridisatie
Er zijn veel toepassingen van ISH, voornamelijk in de moleculaire diagnostiek van infectieziekten om de aanwezigheid van ziekteverwekkers te identificeren en de ziekteverwekker te bevestigen via moleculaire diagnostiek. Het wordt ook gebruikt op het gebied van ontwikkelingsbiologie, karyotypering en fylogenetische analyse en het fysiek in kaart brengen van chromosomen.
Wat is immunohistochemie (IHC)?
In de techniek van IHC is het belangrijkste geanalyseerde molecuul het antigeen. Tijdens IHC worden monoklonale en polyklonale antilichamen gebruikt om de aanwezigheid van antigenen te bepalen bij infectie of de status van kwaadaardige celproliferatie. De techniek is gebaseerd op antigeen-antilichaambinding en voor deze techniek worden enzymlabels gebruikt; een dergelijke toepassing is de ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). De markers kunnen ook fluorescerende antilichamen of radiogelabelde antilichamen zijn.
Figuur 02: Immunohistochemie
IHC wordt veel gebruikt voor het opsporen van kankercellen. De diagnostische procedures richten zich op de antigenen die aanwezig zijn op de tumorcellen om de tumor te identificeren en te karakteriseren. Dezelfde procedure is opgenomen om infectieuze agentia te diagnosticeren. Monoklonale en polyklonale antilichamen worden ook gebruikt om verschillende genproducten te analyseren door de antilichaam-antigeenbindingsreactie tussen het gewenste eiwit en het toegediende synthetische antilichaam mogelijk te maken.
Wat zijn de overeenkomsten tussen in situ hybridisatie en immunohistochemie?
- ISH en IHC zijn zeer specifieke reacties.
- Beide technieken zijn zeer nauwkeurig.
- Beide technieken kunnen worden gebruikt in de diagnostiek van kanker en infectieziekten.
- Deze technieken worden uitgevoerd in steriele in-vitro-omgevingen.
- Beide zijn snelle technieken die reproduceerbare resultaten opleveren.
- ISH en IHC gebruiken detectiemethoden zoals radiolabeling en fluorescentietechnieken.
Wat is het verschil tussen in situ hybridisatie en immunohistochemie?
In situ hybridisatie versus immunohistochemie |
|
| ISH is een nucleïnezuurhybridisatietechniek die direct wordt uitgevoerd op een deel of sectie van weefsel of het gehele weefsel. | IHC is een techniek waarbij monoklonale en polyklonale antilichamen worden gebruikt om de aanwezigheid van antigenen te bepalen, dit zijn speciale eiwitmarkers die op de celoppervlakken worden geplaatst. |
| Type geanalyseerde biomoleculen | |
| ISH analyseert nucleïnezuren. | IHC analyseert eiwitten-antigenen. |
| Basis van biochemische reactie | |
| Complementaire basenparing tussen DNA-DNA of DNA-RNA vindt plaats in deze techniek. | Antigen-antilichaam-interacties zijn betrokken bij immunohistochemie. |
| Enzym-gekoppelde detectiemethoden | |
| Enzymgekoppelde detectiemethoden kunnen niet worden gebruikt in ISH. | Enzym-gekoppelde detectiemethoden kunnen worden gebruikt in IHC. |
Samenvatting – In situ hybridisatie versus immunohistochemie
Moleculaire diagnostiek zijn snelle en bevestigende methoden die kunnen worden gebruikt om een niet-overdraagbare ziekte zoals kanker of overdraagbare ziekte zoals HIV of Tuberculose te identificeren op basis van de moleculaire markers die aanwezig zijn op de cellen die leiden tot de manifestatie van de ziekte. Moleculaire markers kunnen aanwezig zijn in de vorm van tot expressie gebrachte eiwitten of op genetisch niveau op basis waarvan verschillende nieuwe technieken worden geïntroduceerd om de efficiëntie te verhogen en zijn minder arbeidsintensief, hoewel deze technieken hoge kosten met zich meebrengen. ISH hangt dus af van de vorming van DNA-DNA of DNA-RNA hybride, en IHC hangt af van de specifieke reacties tussen antilichaam en antigeen. Dit is het verschil tussen in situ hybridisatie.
Download PDF-versie van in situ hybridisatie versus immunohistochemie
U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden volgens de citatienota. Download hier de PDF-versie. Verschil tussen in situ hybridisatie en immunohistochemie.
