Het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie is dat de directe immunofluorescentie een enkel antilichaam gebruikt dat tegen het beoogde doelwit werkt, terwijl de indirecte immunofluorescentie twee antilichamen gebruikt om het doelwit van interesse te labelen.
Immunofluorescentie of celbeeldvorming is een techniek die wordt gebruikt om een specifiek doelantigeen te labelen met een fluorofoor. Hier is de fluorofoor een fluorescerende chemische verbinding die licht opnieuw kan uitzenden bij lichtexcitatie. Wanneer een fluorofoor bindt met het doelantigeen, kan het doelmolecuul in het monster worden gedetecteerd. Om het verder te beschrijven, wanneer een antigeen bindt met een specifiek antilichaam, kan het worden geconjugeerd met fluoroforen. Daarom is het gemakkelijk om de aanwezigheid van het doelantigeen in het monster te detecteren bij observatie onder de fluorescentiemicroscoop.
Bovendien zijn er twee soorten immunofluorescentie; directe en indirecte immunofluorescentie. Het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie ligt voornamelijk in het aantal gebruikte antilichamen en de fluorofoorconjugatie. Dat wil zeggen, bij directe immunofluorescentie conjugaat de fluorofoor direct aan het primaire antilichaam, terwijl bij indirecte immunofluorescentie de fluorofoor conjugaat met het secundaire antilichaam.
Wat is directe immunofluorescentie?
Immunofluorescentie gebruikt antilichamen om specifieke doelantigenen te detecteren. Directe immunofluorescentie is een van de twee soorten immunofluorescentie. Bij directe immunofluorescentie omvat een enkel antilichaam (primair antilichaam) en de fluorofoor conjugeert direct met het primaire antilichaam. Na binding van het antilichaam aan het doelantigeen, zendt fluorofoor fluorescentie uit die kan worden gedetecteerd door een fluorescentiemicroscoop.
Figuur 01: Directe immunofluorescentie
Directe immunofluorescentie is echter een dure methode omdat de primaire geconjugeerde antilichamen duur zijn in vergelijking met de secundaire antilichamen. Desalniettemin is er geen extra stap nodig, dus een kortere techniek. Bovendien worden niet-specifieke bindingen verminderd in directe immunofluorescentie. Daarom is de kruisreactiviteit van soorten laag. Maar bij detectie is de gevoeligheid van de directe immunofluorescentie zwak in vergelijking met de indirecte immunofluorescentie.
Wat is indirecte immunofluorescentie?
Indirecte immunofluorescentie is het tweede type immunofluorescentie waarbij twee soorten antilichamen betrokken zijn, zoals primaire en secundaire antilichamen bij de etikettering van het doelantigeen. Bij deze methode wordt de fluorofoor geconjugeerd met het secundaire antilichaam. Daarom omvat deze techniek een extra stap.
Figuur 02: Immunofluorescentie
De gevoeligheid is echter hoog bij deze methode, omdat verschillende fluoroforen kunnen worden geconjugeerd aan secundaire antilichamen en dit de detectie gemakkelijker maakt. Bovendien is indirecte immunofluorescentie minder duur vanwege het feit dat de conjugatie van secundaire antilichamen minder duur en gemakkelijker is. In vergelijking met de directe immunofluorescentie is de kruisreactiviteit van soorten hoog bij de indirecte methode.
Wat zijn de overeenkomsten tussen directe en indirecte immunofluorescentie?
- Het zijn twee soorten immunofluorescentietechniek.
- Primaire antilichamen en fluorofoor zijn bij beide methoden betrokken.
- Ook komt de antigeen-antilichaamreactie bij beide methoden voor.
- Bovendien gebruiken zowel directe als indirecte immunofluorescentie een fluorescentiemicroscoop voor de detectie van antigeen.
Wat is het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie?
Immunofluorescentie kan direct of indirect zijn op basis van de fluorofoorconjugatie met de gebruikte antilichamen. Bij directe immunofluorescentie conjugeert de fluorofoor met het primaire antilichaam, het enige antilichaam dat bij deze techniek betrokken is. In tegenstelling daarmee conjugeert de fluorofoor bij indirecte immunofluorescentie met het secundaire antilichaam, dat een van de twee soorten antilichamen is die bij de techniek betrokken zijn. Daarom is het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie het antilichaamtype dat conjugeert met de fluorofoor.
De volgende infographic biedt een zij aan zij vergelijking van het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie.
Samenvatting – Directe versus indirecte immunofluorescentie
Immunofluorescentie is een techniek die wordt gebruikt om de aanwezigheid van specifieke antigenen in een monster te detecteren. Deze techniek maakt gebruik van specifieke antilichamen. Daarom conjugeren de antilichamen hierin met fluoroforen om ze te detecteren met behulp van een fluorescentiemicroscoop. Bovendien zijn er twee soorten immunofluorescentie, namelijk directe en indirecte immunofluorescentie. Directe immunofluorescentie omvat een enkel antilichaam en fluorofoor die direct aan dit antilichaam is geconjugeerd. Indirecte immunofluorescentie omvat twee antilichamen; primair en secundair en fluorofoor geconjugeerd aan het secundaire antilichaam. Aangezien verschillende secundaire antilichamen kunnen binden met een primair antilichaam en verschillende fluoroforen kunnen conjugeren met secundaire antilichamen, is indirecte immunofluorescentie een gevoeliger methode dan de directe methode. Bovendien is de indirecte methode goedkoper dan de directe methode. Dit is dus het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie.
