Belangrijk verschil - Gelelektroforese versus SDS-pagina
Gelelektroforese is een techniek die macromoleculen in een elektrisch veld scheidt. Het is een veelgebruikte methode in de moleculaire biologie om DNA, RNA en eiwitten uit mengsels te scheiden op basis van hun moleculaire grootte. SDS Page is een soort gelelektroforese die wordt gebruikt om eiwitten te scheiden van een eiwitmengsel op basis van hun grootte. Gelelektroforese is een term die wordt gebruikt om te verwijzen naar de normale techniek die wordt toegepast voor DNA-, RNA- en eiwitscheiding, terwijl SDS Page een één type gelelektroforese is. Dit is het belangrijkste verschil tussen gelelektroforese en SDS-pagina.
Wat is gelelektroforese?
Gelelektroforese is een veelgebruikte techniek die in laboratoria wordt gebruikt om geladen moleculen zoals DNA, RNA, eiwitten, enz. uit hun mengsels te scheiden. Bij gelelektroforese wordt een gel gebruikt. Het werkt als een moleculaire zeef. Er zijn twee soorten gels die worden gebruikt bij gelelektroforese, namelijk agarose en polyacrylamide. Selectie van een gel en gelpreparaat zijn belangrijke factoren waarmee rekening moet worden gehouden bij gelelektroforese, aangezien de poriegrootte van de gel zorgvuldig moet worden gemanipuleerd voor een goede scheiding van moleculen door middel van gelelektroforese. Gelelektroforese heeft een elektrisch veld dat is verbonden met twee uiteinden van de gel. Het ene uiteinde van de gel vertoont een positieve lading, terwijl het andere uiteinde negatief is geladen.
DNA en RNA zijn negatief geladen moleculen. Zodra ze vanaf het negatieve uiteinde van de gel in de gel zijn geladen en op het elektrische veld zijn aangebracht, migreren ze door de gelporiën naar het positief geladen uiteinde van de gel. De snelheid van de migratie hangt af van de lading en de grootte van het molecuul. Kleinere moleculen migreren gemakkelijk door de gelporiën dan grotere moleculen. Vandaar dat kleinere moleculen een lange afstand door de gel afleggen en de grotere moleculen een korte afstand. Om het reizen van moleculen op de gel te observeren, worden speciale soorten kleurstoffen gebruikt. Het elektrische veld wordt gedurende een bepaalde tijdsperiode aangelegd en gestopt om het verlies van moleculen te voorkomen en om de moleculen op hun afgelegde positie te houden. In de gel kunnen verschillende banden worden waargenomen. Deze banden vertegenwoordigen de moleculen van verschillende groottes. Daarom is gelelektroforese nuttig om moleculen te differentiëren op basis van hun grootte.
Gelelektroforese wordt in verschillende technieken verwerkt als een voorbereidende techniek in de moleculaire biologie, zoals PCR, RFLP, klonen, DNA-sequencing, Southern blotting, genoommapping, enz.
Figuur 01: Agarosegelelektroforese
Wat is een SDS-pagina?
Natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-pagina) is een type gelelektroforese dat wordt gebruikt om eiwitten te scheiden. Wanneer gelelektroforese wordt gebruikt om eiwitten te scheiden, zijn speciale behandelingen nodig omdat eiwitten niet negatief geladen zijn zoals DNA en RNA en niet migreren naar het positieve of negatieve uiteinde. Daarom worden eiwitten voorafgaand aan gelelektroforese gedenatureerd en gecoat met een negatieve lading. Het wordt gedaan met behulp van een wasmiddel genaamd natriumdodecylsulfaat (SDS). De gelelektroforese waarbij gebruik wordt gemaakt van SDS en een polyacrylamidegel voor het ondersteunende medium staat bekend als SDS Page. Deze techniek wordt veel gebruikt in de biochemie, genetica, forensisch onderzoek en moleculaire biologie.
Tijdens SDS Page worden eiwitten gemengd met SDS. SDS ontvouwt eiwitten in een lineaire vorm en bedekt ze met een negatieve lading die evenredig is met hun molecuulmassa. Vanwege de negatieve lading migreren eiwitmoleculen naar het positieve ladingsuiteinde van de gel en scheiden zich volgens hun moleculaire massa. In SDS Page wordt polyacrylamide gebruikt als vaste drager voor de gel. De daadwerkelijke scheiding van de eiwitten hangt voornamelijk af van de eigenschappen van de gel. Daarom moet de bereiding van polyacrylamidegel zorgvuldig gebeuren en moeten de juiste concentraties polyacrylamide worden gebruikt. Polyacrylamidegels vertonen een hoge resolutie dan agarosegels. Daarom wordt SDS-pagina beschouwd als een techniek met hoge resolutie voor eiwitscheiding.
SDS Page is een soort denaturerende gelelektroforese. Het heeft een belangrijke beperking in eiwitanalyse. Aangezien SDS eiwitten denatureert voorafgaand aan scheiding, is het niet mogelijk om enzymatische activiteit, eiwitbindingsinteracties, eiwitcofactoren, enz. te detecteren.
Figuur 02: SDS-pagina
Wat is het verschil tussen gelelektroforese en SDS-pagina?
Gelelektroforese versus SDS-pagina |
|
| Gelelektroforese is een methode die wordt uitgevoerd om macromoleculen te scheiden met behulp van een elektrisch veld. | SDS Page is een gelelektroforesetechniek met hoge resolutie die wordt gebruikt om eiwitten te scheiden op basis van hun massa. |
| Gel Run | |
| Het kan op een horizontale of verticale manier worden uitgevoerd. | SDS-pagina loopt altijd verticaal. |
| Basis voor scheiding | |
| Scheiding vindt plaats op basis van de lading en de grootte. | Eiwitscheiding vindt plaats op basis van massa en lading. |
| Resolutie | |
| Agarosegelelektroforese heeft een lage resolutie en polyacrylamidegelelektroforese heeft een hogere resolutie | SDS-pagina heeft een betere resolutie. |
| Denaturatie | |
| Gelelektroforese omvat zowel denaturerende als niet-denaturerende technieken. | SDS-pagina denatureert eiwitten voorafgaand aan scheiding. |
Samenvatting – Gelelektroforese versus SDS-pagina
Gelelektroforese is een veelgebruikte techniek die wordt gebruikt voor de scheiding en analyse van DNA, RNA en eiwitten op basis van hun grootte en lading. Er zijn twee hoofdtypen gelelektroforese, namelijk agarosegelelektroforese en polyacrylamidegelelektroforese. Agarosegels worden voornamelijk gebruikt voor nucleïnezuurscheiding; wanneer een hogere resolutie vereist is, worden polyacrylamidegels gebruikt. SDS Page is een type gelelektroforese dat gewoonlijk wordt gebruikt om complexe mengsels van eiwitten te scheiden. Het wordt beschouwd als een techniek voor het scheiden van eiwitten met een hoge resolutie. Dit is het verschil tussen gelelektroforese en SDS Page.
