Belangrijk verschil - Nitrocellulose versus nylonmembraan
Blotting is een belangrijke techniek voor de detectie van specifieke sequenties van DNA, RNA en eiwitten uit hun mengsels in de moleculaire biologie. Het wordt gedaan met behulp van een membraan genaamd blot. Er zijn verschillende blotting technieken zoals Northern, Southern en Western blotting. Het selecteren van een geschikt membraan voor het blotproces moet zorgvuldig worden gedaan om niet-specifieke binding en verkeerde detecties te voorkomen. Nitrocellulose, nylon en PVDF zijn veelgebruikte membranen bij blotting-technieken. Ze hebben verschillende kenmerken. Het belangrijkste verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan is dat nitrocellulosemembranen een hoog eiwitimmobilisatiepotentieel hebben, terwijl nylonmembranen een hoog nucleïnezuurimmobilisatiepotentieel hebben. Beide soorten membranen worden echter vaak gebruikt bij blotting-technieken.
Wat is een nitrocellulosemembraan?
Nitrocellulosemembraan is een veelgebruikt membraanfilter in nucleïnezuur- en eiwitblottechnieken. Het heeft een hoog eiwitbindend vermogen. Daarom worden nitrocellulosemembranen veel gebruikt in de western blotting-techniek. Nitrocellulosemembranen zijn compatibel met alle hybridisatietechnieken en vertonen superieure bindingscapaciteiten zonder interferenties. Nitrocellulosemembranen zijn van nature hydrofiel van aard. Ze maken hydrofiele interactie met moleculen en immobiliseren ze efficiënt op het membraan. Commerciële nitrocellulosemembranen zijn verkrijgbaar in twee poriegroottes: 0,45 en 0,2 µm.
Figuur 01: Nitrocellulosemembraan gebruikt bij western blotting
Wat is een nylon membraan?
Nylonmembraan is een ander type commercieel membraan dat wordt gebruikt bij blottechnieken. Het wordt ook gebruikt met nitrocellulosemembranen voor Southern en Northern blotting. Nylon membranen zijn ideaal voor Southern blotting dan nitrocellulose vanwege hun hoge affiniteit voor binding met DNA. Vanwege verschillende unieke kenmerken van nylonmembranen, gebruiken onderzoekers gewoonlijk nylonmembranen voor Southern en Northern blotting in plaats van over nitrocellulosemembraan. Nylon membranen worden ook aanbevolen voor strippen en opnieuw testen, in tegenstelling tot nitrocellulose.
Figuur 02: Nylon membraan gebruikt voor Southern blotting
Wat is het verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan?
Nitrocellulose versus nylonmembraan |
|
| Nitrocellulosemembranen zijn broos. | Nylonmembranen zijn minder bros. |
| Behandeling | |
| Ze zijn moeilijk te hanteren. | Ze zijn gemakkelijk te hanteren. |
| Reprobing | |
| Niet-ondersteunde nitrocellulosemembranen zijn moeilijk opnieuw te onderzoeken. | Reprobing is eenvoudig met nylon membranen. |
| Compatibiliteit met verschillende opslagomstandigheden | |
| Nitrocellulosemembranen zijn minder sterk om verschillende opslagomstandigheden te weerstaan. | Nylonmembranen reageren robuuster op verschillende opslagomstandigheden. |
| Gebruik | |
| Voorbevochtiging is vereist. | Voorbevochtiging is niet vereist voor nylon membranen. |
| Hydrofiele natuur | |
| Nitrocellulosemembranen zijn hydrofiel van aard, maar minder hydrofiel dan nylonmembranen. | Ze zijn zeer hydrofiel van aard. |
| Immobilisatiepotentieel | |
| Nitrocellulosemembranen hebben minder affiniteit voor nucleïnezuren. Maar het heeft een hoge affiniteit voor eiwitten. | Nylonmembranen hebben een hoog bindingspotentieel met nucleïnezuren dan nitrocellulosemembranen. |
Samenvatting – Nitrocellulose versus nylonmembraan
Nitrocellulose- en nylonmembranen zijn speciale vellen die in de blottingtechniek worden gebruikt om het strepenpatroon op de gel te reproduceren. Ze maken het mogelijk om een specifieke sequentie of een eiwit uit de mengsels te detecteren door ze op het membraan te immobiliseren. Zodra de moleculen op het membraan zijn geïmmobiliseerd, kan het worden gebruikt als een substraat voor hybridisatie-analyse met gelabelde probes. Nitrocellulosemembraan wordt vaak gebruikt voor eiwitdetectie in de western blotting-techniek vanwege de hoge bindingsaffiniteit met eiwitten. Nylon membranen worden vaak gebruikt voor Southern en Northern blotting. Dit is het verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan.
