Belangrijk verschil – CFU vs MPN
Kolonievormende eenheid (CFU) en Most probable number (MPN) zijn twee methoden die worden gebruikt om micro-organismen in monsters te tellen. Beide parameters worden gebruikt om waterkwaliteit en fecale indicatorbacteriën in watermonsters te detecteren. Kolonievormende eenheid is een maatstaf die wordt gebruikt om het aantal levensvatbare bacteriecellen of schimmelcellen in specifiek volume of gewicht van een bepaald monster op te sommen. De standaardeenheid voor deze parameter is CFU/ml of CFU/g. Het meest waarschijnlijke getal is een andere eenheid die wordt gebruikt om het aantal levensvatbare bacteriële cellen in een vloeibaar monster te meten. Het belangrijkste verschil tussen CFU en MPN is dat CFU wordt berekend op basis van de bacterie- en schimmelkolonies die op een vaste agarplaat groeien, terwijl MPN wordt berekend op basis van levensvatbare bacteriën die in een vloeibaar medium groeien.
Wat is CFU?
Kolonievormende eenheid (CFU) is een parameter die het aantal levensvatbare bacteriële of schimmelcellen in een bepaald monster meet. De methode die kolonievormende eenheden telt, wordt het standaard aantal platen genoemd. De levensvatbare kolonies die op de agarplaten verschijnen, worden uitgedrukt als KVE per 1 ml (kolonievormende eenheid per milliliter) van het monster voor vloeistoffen of KVE per 1 g (kolonievormende eenheid per gram) van het monster voor vaste stoffen.
Er zijn twee veelgebruikte methoden om CFU in een monster te meten. Ze zijn de spreidplaatmethode en de gietplaatmethode. Deze twee methoden worden ondersteund door een techniek die seriële verdunning wordt genoemd. Serieel verdunde monsters maken het mogelijk om een telbaar aantal kolonies op het agar-oppervlak te verkrijgen. Een bekend monstervolume kan op het oppervlak van een agarplaat worden uitgesmeerd, of met agar worden gemengd en op een plaat worden gegoten. De plaat wordt vervolgens geïncubeerd en de ontstane kolonies worden geteld. Het aantal kolonies heeft betrekking op het aantal micro-organismen in het oorspronkelijke monster. De platen die te veel kolonies of te weinig kolonies vertonen, worden van de telling uitgesloten omdat de resultaten op die platen mogelijk niet statistisch nauwkeurig zijn. Statistisch gezien is het beste bereik 30 - 300 kolonies op een agarplaat. Daarom moeten de juiste platen worden geselecteerd voor een nauwkeurige telling. Seriële verdunning wordt uitgevoerd voor de bovenstaande functie.
Zodra u het aantal levensvatbare kolonies op platen heeft geteld, kan CFU/ml worden berekend met behulp van de volgende vergelijking.
CFU per ml origineel monster=aantal kolonies op een plaat X verdunningsfactor
Verdunningsfactor=(1/ Verdunning van de plaat)
Als u bijvoorbeeld 149 kolonies op de plaat van de 10-4 verdunning krijgt, kan het aantal bacteriën in 1 ml van het oorspronkelijke monster als volgt worden berekend:
KVE/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 of 1490000
=1. 49 x 106
Figuur 01: Kolonie-vormende eenheid
Wat is MPN?
Het meest waarschijnlijke getal is een alternatieve maat voor KVE/ml. MPN schat ook de levensvatbare cellen in een vloeibaar monster. Het telt organismen die in een vloeibare cultuur groeien en is een overwegend bacteriologische techniek. Deze methode is bijzonder nuttig voor monsters die lage concentraties bacteriële cellen bevatten; bijvoorbeeld melk, drinkwater enz. MPN-waarde wordt uitgedrukt voor 100 ml volume. MPN gaat uit van een statistische methode op basis van kansrekening. Er zijn statistische tabellen ontworpen om MPN-waarden per 100 ml van het monster te vinden. Deze tabellen tonen de resultaten bij 95% betrouwbaarheidslimieten.
MPN-waarde wordt berekend na het uitvoeren van een techniek die fermentatiemethode met meerdere buizen wordt genoemd. Drie sets buizen met een geschikt kweekmedium worden geënt met drie verschillende volumes van het monster, zoals 10 ml, 1 ml en 0.1 ml en geïncubeerd voor de groei. Na de incubatieperiode worden buizen gescoord + (positief) of – (negatief) voor de aan- of afwezigheid van groei. Het patroon van positieve en negatieve resultaten wordt vervolgens vergeleken met een MPN-tabel met statistische kansen om het aantal micro-organismen te schatten. Vervolgens wordt de MPN-waarde gegeven voor 100 ml van het monster. MPN wordt veel gebruikt om coliforme bacteriën in watermonsters te detecteren.
Figuur 02: MPN-tabel
Wat is het verschil tussen CFU en MPN?
CFU vs MPN |
|
| KVE is een maat die wordt gebruikt om het aantal levensvatbare bacterie- of schimmelkolonies in een bepaald monster uit te drukken. | MPN is een alternatieve maatstaf voor CFU en meet het aantal levensvatbare bacteriële cellen in een vloeibaar monster. |
| Eenheid | |
| KVE/ml of KVE/g | MPN/100 ml |
| Berekening | |
| CFU wordt berekend door het aantal kolonies te tellen dat op agarplaten is gegroeid. | MPN wordt berekend door positieve en negatieve patronen van de buizen te vergelijken met de statistische MPN-tabel. |
| Seriële verdunningstechniek | |
| Seriële verdunning wordt uitgevoerd voordat de monsters op agarplaten worden geplaatst. | Seriële verdunning wordt normaal gesproken niet uitgevoerd wanneer MPN wordt berekend |
| Methoden | |
| Smeerplaatmethode en gietplaatmethode zijn twee soorten methoden die worden uitgevoerd om CFU te verkrijgen. | Vergisting met meerdere buizen is de methode die wordt uitgevoerd om de MPN-waarde te verkrijgen. |
Samenvatting – CFU vs MPN
Het meten van de microbiële groei is om vele redenen nodig. In voedselverwerkende fabrieken is het noodzakelijk om het niveau en type micro-organismen in voedsel te meten. In de voedingsindustrie en de geneeskunde is het noodzakelijk ervoor te zorgen dat sterilisatiebehandelingen effectief worden toegepast. In rioolwaterzuiveringsinstallaties is het verplicht om routinematig de microbiële telling te doen. Bij het optimaliseren van de procedure in de moleculaire biologie is het nodig om het aantal kolonies op platen te meten. Daarom zijn er verschillende telling- en groeimeetmethoden beschikbaar. CFU en MPN zijn twee van dergelijke methoden die op verschillende gebieden algemeen worden toegepast. CFU is een maat voor het aantal levensvatbare bacterie- en schimmelkolonies dat aanwezig is in een bepaald monster. Het wordt berekend met behulp van de standaard plaattellingsmethode of de levensvatbare plaattellingsmethode. MPN is een andere maat die het aantal bacteriële cellen uitdrukt dat aanwezig is in een bepaald volume van het vloeibare monster. Het wordt berekend met behulp van de fermentatiemethode met meerdere buizen en de MPN-tabel. Dit is het verschil tussen CFU en MPN.
Download PDF-versie van CFU vs MPN
U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden volgens de citatienotities. Download hier de PDF-versie. Verschil tussen CFU en MPN.
