Belangrijk verschil – RPMI vs DMEM
De meeste onderzoeken hebben betrekking op het kweken van dierlijke cellen en daarom vereisen deze onderzoeken het onderhoud van dierlijke cellijnen onder speciale groeiomstandigheden. Het kweken van dierlijke cellen wordt op grote schaal uitgevoerd in farmacologische studies om het metabolisme van geneesmiddelen te identificeren, bij ziektediagnostiek en bij kankeronderzoek. De celkweekmedia is een belangrijk aspect van dierlijke celkweek. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) en Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) zijn twee kweekmedia die worden gebruikt bij het kweken van dierlijke cellen. RPMI is een medium dat veel wordt gebruikt om zoogdiercellen in suspensiekweek te kweken. DMEM is een gemodificeerd type basaal medium, met verhoogde aminozuur- en vitamineconcentraties tot een verviervoudiging. DMEM wordt gebruikt bij het kweken van cellen in hechtende culturen. Het belangrijkste verschil tussen de twee media is het type cultuur van de media. RPMI wordt gebruikt op suspensieculturen, terwijl DMEM wordt gebruikt om hechtende cellen te kweken.
Wat is RPMI?
RPMI of Roswell Park Memorial Institute Medium wordt ook wel RPMI 1640 genoemd. De naam van de media is afgeleid door het instituut waarin de media zijn ontdekt. Dit medium wordt vaak gebruikt in dierlijke celcultuur, vooral voor de groei van zoogdiercellen. Ze werden oorspronkelijk ontwikkeld om menselijke lymfocyten te laten groeien.
De volgende ingrediënten zijn opgenomen in de RPMI.
- Glucose
- pH-indicator (fenolrood)\
- Zouten (natriumchloride, natriumbicarbonaat, dinatriumfosfaat, kaliumchloride, magnesiumsulfaat en calciumnitraat)
- Aminozuren
- Vitaminen (i-inositol, cholinechloride, para-aminobenzoëzuur, foliumzuur, nicotinamide, pyridoxinehydrochloride, thiaminehydrochloride, calciumpantothenaat, biotine en riboflavine, cyanocobalamine)
Het bijzondere van RPMI is de verhoogde fosfaatconcentratie in het medium. RPMI wordt gebruikt in een atmosfeer van 5% koolstofdioxide. Dit zorgt voor de maximale en optimale omstandigheden voor de celgroei. De pH van de media wordt op 8,0 gehouden door het bicarbonaatbuffersysteem.
Figuur 01: Celkweek op een petrischaal
Toepassingen van RPMI in celkweek
- Kweek van menselijke T- en B-lymfocyten, beenmergcellen en hybridoma.
- Wordt gebruikt om menselijke neoplastische cellen te bestuderen.
Wat is DMEM?
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) is een gemodificeerd medium dat commercieel wordt bereid. De originele textuur van het medium poeder is geel. Bij DMEM wordt de vitamineconcentratie tot het viervoudige verhoogd, waardoor het geh alte aan voedingsstoffen in het medium toeneemt.
DMEM wordt ook gemodificeerd door meer zouten toe te voegen, zoals ijzer(III)nitraat, natriumpyruvaat en enkele niet-essentiële aminozuren zoals serine en glycine. De formulering van glucose in de media is ook veranderd. De oorspronkelijke formulering is samengesteld uit 1000 mg/L glucose, terwijl bij DMEM de concentratie wordt verhoogd tot 4500 mg/L. DMEM vereist ook suppletie van een serummedium omdat het geen compleet medium is. Meestal wordt DMEM aangevuld met Foetaal Bovine Serum (FBS). FBS levert de benodigde eiwitten en groeifactoren voor het kweekproces.
De pH van het medium varieert bij toevoeging van natriumbicarbonaat. De pH van het medium vóór toevoeging van natriumbicarbonaat is ongeveer 6,80 - 7,40, terwijl de pH na toevoeging van natriumbicarbonaat in het bereik van 7,60 - 8,20 ligt. De bewaartemperatuur van het medium is 2 – 8 0C.
Figuur 02: DMEM
Toepassingen van DMEM
- Het plaquevormende vermogen van het polyomavirus in embryonale cellen van muizen bestuderen.
- In onderzoek naar contactremming.
- In onderzoek en analyse van kippencelculturen.
Wat zijn de overeenkomsten tussen RPMI en DMEM?
- Zowel RPMI als DMEM worden gebruikt in dierlijke celculturen.
- Zowel RPMI- als DMEM-media zijn vloeibare formuleringen.
- Zowel RPMI- als DMEM-media bevatten de essentiële aminozuren, vitamines en anorganische zouten die nodig zijn voor groei.
- Zowel RPMI- als DMEM-media zijn onvolledig. Daarom moet serum worden toegevoegd.
- Zowel RPMI- als DMEM-media gebruiken glucose als koolstofbron.
- Zowel RPMI- als DMEM-media hebben een hogere pH.
Wat is het verschil tussen RPMI en DMEM?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI is een medium dat veel wordt gebruikt om zoogdiercellen in een suspensiekweek te kweken. | DMEM is een gemodificeerd type basaal medium met verhoogde aminozuur- en vitamineconcentraties. |
| Aanwezigheid van extra fosfaten | |
| Aanwezig in RPMI. | Afwezig in DMEM. |
| Gebruik | |
|
Wordt gebruikt om cellen in hechtende culturen te kweken. Het is gewend om,
|
| Soorten cultuur | |
| RPMI wordt gebruikt voor suspensieculturen. | DMEM wordt gebruikt voor culturen met celgehechte. |
Samenvatting – RPMI vs DMEM
Zowel RPMI als DMEM worden veel gebruikt bij het kweken van dierlijke cellen, met name om dierlijke cellijnen, waaronder lymfocyten, in vitro te kweken. DMEM is een gemodificeerd basaal medium waar sprake is van een verhoogde nutriëntenconcentratie. RPMI ontwikkeld door Roswell Park Memorial Institute, en het is ook een medium dat wordt gebruikt bij het kweken van dierlijke cellen, vooral voor lymfocyten van zoogdieren. Beide media zijn in de handel verkrijgbaar. Dit is het verschil tussen RPMI en DMEM.
