Het belangrijkste verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA is dat competitieve ELISA een remmend antigeen gebruikt, terwijl niet-competitieve ELISA geen remmend antigeen voor de test gebruikt.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) is een immunologische test die verschillende doelen detecteert, zoals antilichamen, antigenen, eiwitten en glycoproteïnen. Het is een snelle en eenvoudige methode om uit te voeren. Daarom wordt het vaker gebruikt voor onderzoeks- en diagnostische doeleinden. ELISA omvat het gebruik van enzymen en de specifieke binding van antilichaam en antigeen. Op basis van hoe de reacties plaatsvinden, zijn er vier soorten ELISA: directe ELISA, indirecte ELISA, sandwich-ELISA en inhibitie-ELISA. Directe, indirecte en sandwich-ELISA zijn typen niet-competitieve ELISA, terwijl inhibitie-ELISA een type completieve ELISA is. Het belangrijkste doel van dit artikel is om het verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA te bespreken.
Wat is Competitive ELISA?
Competitive ELISA meet de antigeenconcentratie in een monster door detectie van signaalinterferentie. Hier gebruikt de test een remmend antigeen. Daarom is het een type inhibitie-ELISA. Tijdens deze procedure concurreren de antigenen die in het monster aanwezig zijn met het geselecteerde referentieantigeen voor binding aan een specifieke hoeveelheid gelabeld antilichaam. Bovendien begint deze procedure met de incubatie van het monster, met de overmatige hoeveelheid gelabeld antilichaam. Ook moet het referentie-antigeen vooraf worden gecoat op een testplaat met meerdere putjes. Vervolgens moet het monstermengsel worden toegevoegd aan de testplaat die het referentie-antigeen bevat. Vrije antilichamen zullen binden aan het referentie-antigeen, afhankelijk van de hoeveelheid antigeen in het monster. Als er dus meer monsterantigeen aanwezig is, zal er minder referentieantigeen worden gedetecteerd. Het creëert dus een zwakker signaal.
Figuur 01: ELISA
Als het monster daarentegen minder antigeen bevat, zullen steeds meer referentieantigeen de antilichamen bezetten en een sterk signaal geven. Aangezien competitieve ELISA een sterker signaal geeft wanneer het monster een lage hoeveelheid antigenen bevat, is competitieve ELISA een zeer gevoelige test, zelfs voor monsters met een klein aantal antigenen.
In sommige competitieve ELISA-kits wordt een gelabeld antigeen gebruikt in plaats van een gelabeld antilichaam. Hier zullen het gelabelde antigeen en het monsterantigeen strijden om binding aan het primaire antilichaam. Evenzo, wanneer de hoeveelheid antigeen in het monster laag is, zal de hoeveelheid gelabeld antigeen dat aan antilichamen bindt hoger zijn en een sterker signaal creëren.
Wat is niet-competitieve ELISA?
Van de vier soorten ELISA zijn er drie niet-competitieve ELISA. Ze zijn directe ELISA, indirecte ELISA en sandwich-ELISA. Alle drie de formaten werken volgens het gemeenschappelijke principe van ELISA met kleine verschillen in hun methodologieën.
Directe ELISA gebruikt een met enzym gelabeld primair antilichaam. Daarom heeft het geen secundair antilichaam nodig. Daarom is directe ELISA sneller dan andere soorten ELISA. Het primaire antilichaam zal direct binden aan het geïmmobiliseerde doelantigeen dat in de plaat aanwezig is. Daarom zal de enzym-substraatreactie plaatsvinden, waardoor een zichtbaar signaal wordt geproduceerd.
Figuur 02: Sandwich ELISA
In tegenstelling tot directe ELISA, gebruikt indirecte ELISA een niet-gelabeld primair antilichaam en een enzym-gelabeld secundair antilichaam. Zodra het primaire antilichaam aan het geïmmobiliseerde antigeen bindt, bindt het secundaire antilichaam aan het primaire antilichaam. Het enzym in het secundaire antilichaam zal reageren met het antigeen en een zichtbaar signaal produceren. Sandwich ELISA verschilt van zowel directe als indirecte ELISA. Hier wordt het antilichaam geïmmobiliseerd aan de wand van de testplaat.
Wat zijn de overeenkomsten tussen competitieve en niet-competitieve ELISA?
- Concurrerende en niet-competitieve ELISA zijn twee soorten immunosorbent-assaytechnieken.
- Het zijn zeer flexibele en gevoelige technieken.
- Bovendien zijn zowel competitieve als niet-competitieve ELISA enzymgebonden immunoassays.
- Bovendien genereren beide methoden een signaal vanwege een enzym-substraatreactie.
Wat is het verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA?
Concurrerende ELISA is een type ELISA dat afhankelijk is van de voltooiing tussen analyt-antigeen en gelabeld antigeen voor een beperkte hoeveelheid specifiek antilichaam. Aan de andere kant bestaat een dergelijke competitie niet tussen het antigeen van belang en het referentie-antigeen in niet-competitieve ELISA. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA. Evenzo is competitieve ELISA een inhibitie-ELISA, terwijl niet-competitieve ELISA geen inhibitie-ELISA is. Dit is dus ook een verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA.
Bovendien is competitieve ELISA geschikter om een lage hoeveelheid van belang zijnd antigeen te meten. Het is een gevoelige methode. Aan de andere kant is niet-competitieve ELISA niet afhankelijk van het aantal antigenen dat in een monster aanwezig is. Daarom is dit ook een verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA.
Hieronder infographic legt het verschil uit tussen competitieve en niet-competitieve ELISA in vergelijking.
Samenvatting – Competitieve versus niet-competitieve ELISA
Concurrerende en niet-competitieve ELISA zijn de twee belangrijkste typen ELISA of enzymgekoppelde immunosorbent-assays. Bij het samenvatten van het verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA, vertrouwt de competitieve ELISA op de competitie tussen het antigeen van belang en het referentie-antigeen tegen de beperkte hoeveelheid antilichamen. Daarom wordt competitieve ELISA ook wel inhibitie-ELISA genoemd. Aan de andere kant is niet-competitieve ELISA niet afhankelijk van de concurrentie tussen doelantigenen en referentie-antigenen. Het gebruikt een overmaat aan gelabeld specifiek antilichaam tegen de analyt van belang. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen competitieve en niet-competitieve ELISA. Directe ELISA, indirecte ELISA en sandwich-ELISA zijn de drie belangrijkste soorten niet-competitieve ELISA.
