Het belangrijkste verschil tussen gist één hybride en gist twee hybride is dat gist één hybride een in vitro gebaseerde test is om DNA-eiwit interacties te analyseren, terwijl gist twee hybride een in vitro gebaseerde test is om eiwit-eiwit interacties te analyseren.
Het bestuderen van de interacties tussen cellulaire moleculen kan helpen bij het definiëren van herkenningsplaatsen die betrokken zijn bij genexpressie en eiwitroutes. DNA- en eiwitinteracties zijn een integraal onderdeel van cellulaire processen zoals DNA-modificaties en transcriptionele regulatie, enz. Aan de andere kant spelen eiwit- en eiwitinteracties een vitale rol in cellulaire processen zoals replicatie, transcriptie, translatie en signa altransductie. Daarom is het van cruciaal belang om deze interacties van cellulaire moleculen te identificeren door middel van verschillende testen. Gist één hybride en gist twee hybride zijn twee in vitro gebaseerde testen om DNA-eiwit en eiwit-eiwit interacties te analyseren.
Wat is Yeast One Hybrid?
Gist één hybride (Y1H) is een in vitro gebaseerde test om intracellulaire DNA-eiwit-interacties te analyseren. Deze methode werd voor het eerst vastgesteld door Wang en Reed in 1993. Sindsdien heeft het een grotere kracht laten zien in biologisch onderzoek. In deze test zijn er twee hoofdcomponenten: DNA-aas en eiwitprooien.
Figuur 01: Yeast One Hybrid
In de procedure wordt eerst een DNA-sequentie (DNA-aas) gekloond stroomopwaarts van twee verschillende reporters (HIS3, LacZ). Deze reporterconstructen zijn geïntegreerd in het genoom van een giststam. Transcriptionele factoren worden als eiwitprooien genomen. Transcriptionele factoren worden gefuseerd met het transcriptionele activatiedomein (AD) van de gist-Gal4-transcriptiefactor om hybride eiwitten te maken. Dit hele hybride eiwit wordt geïntegreerd in een plasmide voordat het in de giststam wordt geïntroduceerd. Na de introductie van het recombinante plasmide, wanneer de transcriptiefactor een interactie aangaat met het DNA-fragment, activeert de AD-groep de reportergenexpressie (HIS3 of LacZ). Sequentiebepaling van de plasmiden maakt de identificatie mogelijk van de transcriptionele factor die aan het DNA-fragment kan binden. Onlangs werd een hybride methode met gist gebruikt om de diagnose van ziekten te onderzoeken. Daarom zal deze test in de toekomst op grotere schaal worden gebruikt in wetenschappelijk onderzoek en medische behandelingen.
Wat is Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) is een in vitro gebaseerde test om intracellulaire eiwit- en eiwitinteracties te analyseren. Deze methode werd oorspronkelijk gevonden door Stanley Fields en Ok-Kyu Song in 1989. Deze techniek detecteert eiwit-eiwit-interacties met behulp van de Gal4-transcriptiefactor van de gist.
Figuur 02: Hybride gist twee
Bij deze methode worden eerst twee fusies (hybriden) geconstrueerd met behulp van interessante eiwitten: het ene eiwit fuseren met het DNA-bindende domein (DBD) en door het andere eiwit te fuseren met het activatordomein (AD) van de Gal4-transcriptiefactor. Het eiwit gefuseerd met DBD staat bekend als aas, terwijl het eiwit dat is gefuseerd met AD bekend staat als prooi. In de giststam worden de DBD en AD, na de interactie van het lokaas en de prooi, dicht bij elkaar gebracht om een functionele Gal4-transcriptiefactor stroomopwaarts van het reportergen te genereren. De functionele transcriptiefactor activeert de expressie van het reportergen. Bovendien wordt deze methode momenteel gebruikt om de interacties van integrale membraaneiwitten in zoogdiercellen te screenen.
Wat zijn de overeenkomsten tussen gist één hybride en gist twee hybride?
- Gist één hybride en gist twee hybride zijn twee in vitro gebaseerde testen om DNA-eiwit en eiwit-eiwit interacties te analyseren.
- Deze testen gebruiken giststammen.
- Beide testen gebruiken het activatiedomein (AD) van de Gal4-transcriptiefactor.
- Ze gebruiken expressie van reportergen (HIS3 of LacZ) om interacties te detecteren.
- Ze hebben aas en prooi.
- Beide testen zijn zeer nuttig in modern biologisch onderzoek.
Wat is het verschil tussen Yeast One Hybrid en Yeast Two Hybrid?
Yeast one hybrid is een in vitro-gebaseerde test om DNA- en eiwitinteracties te analyseren, terwijl gist two hybrid een in vitro-gebaseerde test is om eiwit- en eiwitinteracties te analyseren. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen gist één hybride en gist twee hybride. Bovendien is in gist één hybride lokaas een DNA-fragment en is prooi een eiwitmolecuul. Aan de andere kant, in gist twee hybride, zijn zowel aas als prooi eiwitmoleculen.
De onderstaande infographic geeft een overzicht van de verschillen tussen gist één hybride en gist twee hybride in tabelvorm voor zij aan zij vergelijking.
Samenvatting – Gist één hybride versus gist twee hybride
Gist één hybride en gist twee hybride zijn twee belangrijke in vitro gebaseerde testen. Gist één hybride is een in vitro gebaseerde test om DNA- en eiwitinteracties te analyseren, terwijl gist twee hybride een in vitro gebaseerde test is om eiwit- en eiwitinteracties te analyseren. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen gist één hybride en gist twee hybride.
