Belangrijk verschil – Directe versus indirecte ELISA
Een enzymgebonden immunoassay (ELISA), ook bekend als enzymimmunoassay, is een serologische test die antilichamen in het bloed detecteert. Het wordt gebruikt als diagnostisch hulpmiddel om erachter te komen of de patiënt is blootgesteld aan een bepaald type virus of een ander infectieus agens (antigeen) en of het lichaam antilichamen tegen de infectie heeft aangemaakt. ELISA kan ook de vroegere en huidige infecties identificeren. Daarom wordt ELISA vaak gebruikt als een prescreeningtest door de artsen voorafgaand aan een diepgaande analyse van ziekten. Deze test kan in het laboratorium worden uitgevoerd door een bloedmonster af te nemen bij de patiënt. Er zijn twee soorten ELISA-tests: directe ELISA en indirecte ELISA. Het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte ELISA is dat indirecte ELISA gevoeliger is en de toevoeging van een secundair antilichaam vereist, terwijl directe ELISA minder gevoelig is en alleen een primair antilichaam gebruikt.
Wat is directe ELISA?
ELISA is een diagnostische ziektetest die wordt uitgevoerd om de aanwezigheid van bepaalde antigenen of antilichamen in het bloed te identificeren. Het wordt gedaan als een plaattest. Het maakt gebruik van antilichamen die zijn gekoppeld aan gemakkelijk te testen enzymen. De aanwezigheid van antigenen in het serummonster bindt met specifieke antilichamen die zijn gekoppeld aan enzymen. In de laatste stap wordt een specifiek substraat toegevoegd om met het enzym te reageren. Het enzym zet het substraat om in een gekleurd of signaalproducerend product. De kleurverandering in het chemische substraat onthult de aanwezigheid van een bepaald antilichaam in het serummonster. Directe ELISA-test gebruikt alleen een primair antilichaam dat aan het enzym is gekoppeld. Na binding aan het antigeen verandert het snel van kleur, wat wijst op de aanwezigheid van het infectieuze agens in het bloed. De intensiteit van de signalen is echter zwakker bij directe ELISA, aangezien de epitopen beperkt zijn tot binding van de antigenen. Daarom is directe ELISA minder gevoelig in vergelijking met indirecte ELISA.
Figuur 01: Directe ELISA-test
Wat is indirecte ELISA?
ELISA kan worden uitgevoerd met behulp van twee soorten antilichamen namelijk; primair antilichaam en secundair antilichaam. Indirecte ELISA-tool gebruikt beide soorten antilichamen om de signalen te versterken voor een betere detectie. Indirecte ELISA-techniek wordt als volgt uitgevoerd.
- Platen worden geïncubeerd met antigenen en gewassen om niet-specifieke binding te blokkeren.
- Vervolgens worden primaire antilichamen toegevoegd en gewassen.
- Enzymgebonden secundair antilichaam wordt toegevoegd en gewassen.
- Er wordt een substraat toegevoegd en men laat het reageren met enzymen.
- Signalen worden gedetecteerd en de aan- of afwezigheid van het specifieke antigeen in het monster wordt geïdentificeerd.
Bij een indirecte ELISA-test kunnen verschillende secundaire antilichamen aan een enkel primair antilichaam binden. Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan gemakkelijk te testen enzymen. Daarom kan één binding een sterk signaal afgeven vanwege meer dan één interactie. Daarom is indirecte ELISA gevoeliger dan directe ELISA. Indirecte ELISA kan echter niet-specifieke signalen maken als gevolg van kruisreacties van de secundaire antilichamen.
Figuur 02: Indirecte ELISA-test
Wat is het verschil tussen directe en indirecte ELISA?
Direct vs Indirect ELISA |
|
| Directe ELISA is minder gevoelig in vergelijking met indirecte ELISA. | Indirecte ELISA is gevoeliger. |
| Tijd genomen | |
| Directe ELISA-test is een snel proces. | Indirecte ELISA kost veel tijd. |
| Gebruik van antilichamen | |
| Er wordt slechts één type antilichamen (primaire antilichamen) gebruikt bij directe ELISA. | Primaire en secundaire antilichamen worden gebruikt voor indirecte ELISA. |
| Link met enzymen | |
| Primaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen. | Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen. |
| Kruisreactiviteit van tweede antilichamen | |
| Directe ELISA elimineert de kruisreactiviteit van tweede antilichamen. | Indirecte ELISA wordt beïnvloed door kruisreactiviteit van tweede antilichamen. |
| Signalen | |
| Signalen zijn zwak in vergelijking met indirecte ELISA. | Signalen worden versterkt in indirecte ELISA. Daarom is het gemakkelijk te detecteren. |
Samenvatting – Directe versus indirecte ELISA
ELISA is een biochemische techniek die voornamelijk in de immunologie wordt gebruikt om de aanwezigheid van een antilichaam of een antigeen in een bloedmonster van een patiënt te detecteren. Het kan worden uitgevoerd via twee processen die bekend staan als directe of indirecte ELISA. Directe ELISA-test gebruikt alleen primaire antilichamen om het antigeen te detecteren, terwijl indirecte ELISA zowel primaire als secundaire antilichamen gebruikt. Bij directe ELISA worden primaire antilichamen gelabeld, terwijl bij indirecte ELISA secundaire antilichamen worden gelabeld. Dit is het verschil tussen directe en indirecte ELISA.
