Het belangrijkste verschil tussen micronucleus- en komeettest is dat micronucleustest belangrijk is om chromosomale schade als gevolg van blootstelling aan mutageen te controleren, terwijl komeettest belangrijk is om primaire DNA-schade in individuele cellen te detecteren.
Genotoxiciteitstesten helpen om de mogelijkheden van mutaties en chromosomale afwijkingen te beoordelen. Genotoxinen omvatten chemische stoffen en straling. Carcinogenen, mutagenen en teratogenen zijn de belangrijkste categorieën van genotoxins. Ze veroorzaken verschillende soorten schade, zoals puntmutaties, deleties, enkel- en dubbelstrengs breuken, chromosomale aberraties, micronuclei-formaties, DNA-reparatie en celcyclusinteracties. Dergelijke aandoeningen kunnen leiden tot een grote verscheidenheid aan ziekten en genotoxiciteitstests voorkomen de mogelijke schade door deze aandoeningen. Micronucleus-assay en comet-assay zijn twee technieken onder genotoxiciteitsassays.
Wat is Micronucleus Assay?
Micronucleus-test is een test om chromosomale schade als gevolg van blootstelling aan mutagene stoffen te beoordelen. Het is belangrijk bij het screenen van chemicaliën die spindelvorming en micronuclei veroorzaken. Een micronucleus-assay geeft informatie over de stabiliteit van chemicaliën bij interferentie met de chromosoomstructuur en -functie. Veel kankerverwekkende stoffen testen positief in micronucleus-assays. Het testproces omvat een chemische behandeling en het meten van de frequentie van micronucleaire cellen. Als er een abnormale toename is in het aantal micronuclei-cellen, wordt geconcludeerd dat de chemische stof chromosomale schade veroorzaakt.
Een micronucleus-assay wordt meestal uitgevoerd op actief delende cellen. Daarom zijn erytrocyten en beenmergstamcellen geproduceerd door celdelingen ideale kandidaten voor dergelijke testen. Ze ervaren een constante en snelle omzet. Omdat erytrocyten geen echte kernen hebben, worden micronucleaire cellen aan het einde van de test beter zichtbaar.
Figuur 01: Observatie van de micronucleusassay
Micronucleus-assays zijn economisch, sneller, handiger en vereisen minder vaardigheden om uit te voeren. Ze weerspiegelen chromosomale aberraties snel op een betrouwbare manier en zijn uiterst nuttig om chromosomale schade snel te beoordelen. Een speciaal en veelzijdig type micronucleus-assay is de cytokinesis block micronucleus cytome (CBMNcyt) -assay. Het is de voorkeurstest om chromosomale schade en instabiliteit in cellen te meten. Het grootste probleem van het gebruik van micronucleus-assay is echter dat het niet in staat is om verschillende soorten chromosomale afwijkingen te bepalen, en de assay heeft een invloed op de mitotische snelheid en het aandeel van celdood, waardoor de resultaten veranderen.
Wat is Comet Assay?
Comet-assay, ook bekend als single-gel-elektroforese-assay, is een eenvoudige en gevoelige techniek om DNA-schade te detecteren. Het meet de DNA-breuken in eukaryote cellen en is een standaardtechniek voor biomonitoring en genotoxiciteitstesten.
De komeettest is betrokken bij de inkapseling van cellen in agarosesuspensies met laag smeltpunt, lysis van cellen in neutrale of alkalische omstandigheden en elektroforese van gesuspendeerde gelyseerde cellen. Tijdens het inkapselingsproces worden de cellen gesuspendeerd in gesmolten agarose met laag smeltpunt, en de agarose vormt een matrix van koolhydraatvezels om ze op hun plaats te verankeren. Agarose is osmotisch neutraal; daarom kunnen de oplossingen door de gel dringen en de cellen aantasten zonder ze te verstoren en te verschuiven. De lysisoplossing is een sterk geconcentreerde waterige zoutoplossing en een detergens. Dit zout verstoort eiwitten en de bindingspatronen in de cel terwijl het het RNA-geh alte van de cel verstoort. De cellen vernietigen, en alle eiwitten, RNA, cytoplasmatische en nucleoplasmatische bestanddelen, verstoren en diffunderen in de agarosematrix, waardoor het DNA achterblijft.
Figuur 02: Komeettest
De elektroforese-oplossing is een alkalische oplossing waarbij de dubbele DNA-helix denatureert en de nucleoïde enkelstrengs wordt. Tijdens dit proces wordt een elektrisch veld aangelegd om de beelden te analyseren. De beeldanalyse meet de algehele intensiteit van de fluorescentie voor het DNA en de nucleoïde en vergelijkt de twee. De algehele structuur lijkt op een komeet met een ronde kop die overeenkomt met het resterende onbeschadigde DNA en een staart voor het beschadigde DNA. Hoe helderder en langer de staart door sterkere signalen, hoe hoger de schade.
Wat zijn de overeenkomsten tussen micronucleus en komeettest?
- Micronucleus en de komeettest zijn economisch, sneller, handiger en vereisen minder vaardigheden.
- Ze worden voornamelijk uitgevoerd op DNA.
- Beide testen helpen bij het beoordelen van mutaties en chromosomale afwijkingen.
- Bovendien gebruiken beide technieken chemicaliën om de procedure uit te voeren.
Wat is het verschil tussen micronucleus- en komeettest?
De micronucleustest is belangrijk bij het controleren van chromosomale schade als gevolg van blootstelling aan mutageen, terwijl de komeettest belangrijk is bij het detecteren van primaire DNA-schade in individuele cellen. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen micronucleus en komeettest. Ook is de micronucleus-assay goed ingeburgerd om clastogeniciteit en aneugeniciteit te detecteren. De komeettest wordt gebruikt als een genotoxiciteitstest om primaire DNA-schade in cellen te detecteren. Bovendien geeft een micronucleus-assay informatie over de stabiliteit van chemicaliën, terwijl een komeet-assay een gelelektroforese met één cel is.
De onderstaande infographic presenteert de verschillen tussen micronucleus- en komeettest in tabelvorm voor vergelijking naast elkaar.
Samenvatting – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoxiciteitstesten helpen om de mogelijkheden van mutaties en chromosomale afwijkingen te beoordelen. Micronucleus-assay en comet-assay zijn twee technieken onder genotoxiciteitsassays. Micronucleus-assay beoordeelt chromosomale schade als gevolg van blootstelling aan mutageen. Comet-assay is een eenvoudige en gevoelige techniek om DNA-schade te detecteren. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen micronucleus en komeettest. Micronucleus-assay is belangrijk bij het screenen op chemicaliën die spindelvorming en micronuclei veroorzaken. Comet-assay is betrokken bij de inkapseling van cellen in agarosesuspensies met laag smeltpunt, lysis van cellen in neutrale of alkalische omstandigheden en elektroforese van gesuspendeerde gelyseerde cellen.
