Het belangrijkste verschil tussen BCA en Bradford-assay is dat BCA-assay tijdrovend en minder nauwkeurig is, terwijl Bradford-assay snel en nauwkeurig is.
BCA- en Bradford-assay zijn twee testmethoden voor bepaling van de eiwitconcentratie. Deze twee testen hebben verschillende testprincipes en verschillen in hun nauwkeurigheid.
Wat is BCA-assay?
BCA-test of bicinchoninezuurtest is een biochemische test die nuttig is bij het bepalen van de totale eiwitconcentratie in een oplossing. Deze methode wordt ook wel Smith-assay genoemd, naar de uitvinder ervan, Paul K. Smith. Deze analytische methode vertoont overeenkomsten met Lowry-eiwitassay, Bradford-eiwitassay of biureetreagens. We kunnen de totale eiwitconcentratie in een bepaald monster waarnemen door een kleurverandering van de monsteroplossing, die van groen naar paars gaat. Deze kleurverandering vindt plaats in verhouding tot het eiwitgeh alte. Daarna kunnen we een colorimetrische techniek gebruiken om de kleurintensiteit en het eiwitgeh alte in het monster te analyseren.
BCA-methode voor eiwitschatting
Als we kijken naar het mechanisme van BCA-assay, bevat de typische BCA-oplossing een sterk alkalische oplossing met een pH van bijna ongeveer 11,25, en de ingrediënten in deze oplossing omvatten bicinchoninezuur, natriumcarbonaat, natriumbicarbonaat, natriumtartraat en koper(II)sulfaatpentahydraat. Deze test is voornamelijk afhankelijk van twee chemische reacties: de reductie van koper(II) tot koper(I) door de peptidebindingen in eiwit en chelatie van twee moleculen bicinchoninezuur met koper(I)-ionen, wat resulteert in een paars gekleurd complex dat kan licht absorberen bij een golflengte van 562 nm. In de eerste reactie is de hoeveelheid koper (II) verminderd door peptidebindingen evenredig met de hoeveelheid eiwit in het monster.
Wat is Bradford-assay?
Bradford-assay is een spectroscopische analytische methode die nuttig is bij het meten van de eiwitconcentratie in een oplossing. Deze methode is in 1976 ontwikkeld door Marion M. Bradford en is een relatief snelle en nauwkeurige methode.
Kleurreactie van eiwit en Bradford-reagens
We kunnen deze methode gebruiken om de concentratie van de hoeveelheid eiwit in een monster te bepalen. De chemische reactie die tijdens deze test in het monster plaatsvindt, is uitsluitend afhankelijk van de aminozuursamenstelling van het eiwit in het monster.
Bradford-methode voor eiwitschatting
Bij het overwegen van de methode van deze test, is het een colorimetrische eiwittest die is gebaseerd op de absorptieverschuiving van de kleurstof genaamd Coomassie Brilliant Blue G-250. Over het algemeen bestaat deze kleurstof in drie vormen: anionische (blauwe) vorm, neutrale (groene) vorm en kationische (rode) vorm. Daarom verandert de kleurstof onder zure omstandigheden van rood in blauw. Dit komt door de binding van het eiwit met de kleurstof. Als er daarentegen geen eiwit is om met de kleurstof te binden, treedt de kleurverandering niet op, de oplossing krijgt een roodbruine kleur. Deze kleurstof is in staat een sterk, niet-covalent complex te vormen met de carboxylgroep van het eiwit door middel van Van der Waal-krachten en elektrostatische aantrekkingen.
Wat is het verschil tussen BCA en Bradford-assay?
BCA- en Bradford-assay zijn twee testmethoden voor bepaling van de eiwitconcentratie. Deze twee testen hebben verschillende testprincipes en verschillen in hun nauwkeurigheid. Het belangrijkste verschil tussen BCA en Bradford-assay is dat BCA-assay tijdrovend en minder nauwkeurig is, terwijl Bradford-assay snel en nauwkeurig is.
De volgende infographic vat de verschillen tussen BCA en Bradford-assay in tabelvorm samen.
Samenvatting – BCA vs Bradford-assay
BCA-test of bicinchoninezuurtest is een biochemische test die nuttig is bij het bepalen van de totale eiwitconcentratie in een oplossing. Bradford-assay is een spectroscopische analytische methode die nuttig is bij het meten van de eiwitconcentratie in een oplossing. Het belangrijkste verschil tussen BCA en Bradford-assay is dat BCA tijdrovend en minder nauwkeurig is, terwijl Bradford-assay snel en nauwkeurig is.
