Het belangrijkste verschil tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie is dat immunoprecipitatie een techniek is die een eiwit uit de oplossing precipiteert met behulp van een specifiek antilichaam, terwijl co-immunoprecipitatie een techniek is die intacte eiwitcomplexen uit de oplossing precipiteert met behulp van een specifiek antilichaam.
Antigen-antilichaam interactie is een specifieke chemische interactie tussen antilichamen geproduceerd door B-cellen en antigenen (eiwitten) tijdens een immuunreactie. Normaal gesproken combineren oplosbare antigenen met oplosbare antilichamen in aanwezigheid van een elektrolyt bij oplosbare temperatuur en pH om een onoplosbaar zichtbaar complex te maken. Dit wordt een neerslagreactie genoemd. Daarom zijn immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie twee soorten neerslagreacties die routinematig in laboratoria worden gebruikt om eiwitten zoals antigenen te identificeren.
Wat is immunoprecipitatie?
Immunoprecipitatie is een techniek om een eiwit uit een oplossing te precipiteren met behulp van een specifiek antilichaam. Soms is deze techniek ook bekend als individuele eiwitimmunoprecipitatie. Bij immunoprecipitatie wordt een antilichaam gebruikt om een geselecteerd eiwit van belang uit cellysaat te isoleren. Het antilichaam zuivert zijn specifieke doeleiwit of antigeen uit een mengsel. Het antilichaam bindt aan het eiwit en het antilichaam-antigeencomplex wordt uit het monster getrokken. In de experimentele opstelling wordt het antigeen-antilichaamcomplex uitgetrokken met behulp van aan proteïne A/G gekoppelde agarose of magnetische korrels. Later worden de kralen gewassen en wordt het gewenste eiwit geëlueerd. Het gezuiverde eiwit of antigeen dat door immunoprecipitatie wordt verkregen, wordt geverifieerd door een verscheidenheid aan technieken zoals enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) en western blot (WB).
Figuur 01: Immunoprecipitatie
Bovendien kunnen geïsoleerde eiwitten of antigenen worden gekwantificeerd en geïdentificeerd door middel van massaspectrometrie door gebruik te maken van enzymatische verteringspatronen op basis van de primaire sequentie. Er zijn bepaalde overwegingen voordat u een immunoprecipitatie-experiment start: de keuze van het methodeformaat, bindingseiwitten en kralen, het kiezen van het juiste primaire antilichaam en isotype en negatieve controle.
Wat is co-immunoprecipitatie?
Co-immunoprecipitatie is een techniek om intacte eiwitcomplexen uit de oplossing te precipiteren met behulp van een specifiek antilichaam. Co-immunoprecipitatie werkt over het algemeen door een specifiek antilichaam te selecteren dat zich richt op een bekend eiwit (antigeen) waarvan wordt aangenomen dat het een lid is van een groter complex van eiwitten. Door het bekende lid met een specifiek antilichaam te targeten, is het mogelijk om het hele eiwitcomplex uit de oplossing te trekken. Dit maakt de identificatie van de onbekende leden van het complex mogelijk. Het concept van het uit de oplossing trekken van eiwitcomplexen wordt soms het "pull-down"-mechanisme genoemd.
Figuur 02: B Co-immunoprecipitatie
Co-immunoprecipitatie is een krachtige techniek die wordt gebruikt om eiwit-eiwit-interacties te analyseren. Het belangrijkste doel van co-immunoprecipitatie is de identificatie van interactiepartners zoals liganden, cofactoren of signaalmoleculen voor het eiwit van belang. Bovendien is co-immunoprecipitatie een effectieve techniek die wordt gebruikt om eiwitten te scheiden van serum, cellysaat, gehomogeniseerd weefsel of geconditioneerde media.
Wat zijn de overeenkomsten tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie?
- Immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie zijn twee soorten op neerslagreacties gebaseerde technieken.
- Beide technieken kunnen worden gebruikt om doelantigeen te identificeren via een specifiek antilichaam.
- Beide technieken zijn sterk afhankelijk van antigeen-antilichaam interactie.
- Ze worden routinematig gebruikt in klinische laboratoria.
Wat is het verschil tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie?
Immunoprecipitatie is een techniek die een eiwit uit de oplossing precipiteert met behulp van een specifiek antilichaam, terwijl co-immunoprecipitatie een techniek is die intacte eiwitcomplexen uit de oplossing precipiteert met behulp van een specifiek antilichaam. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie. Bovendien wordt immunoprecipitatie vaker gebruikt in laboratoria, terwijl co-immunoprecipitatie niet vaak wordt gebruikt in laboratoria.
De onderstaande infographic presenteert de verschillen tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie in tabelvorm voor vergelijking naast elkaar.
Samenvatting – Immunoprecipitatie versus co-immunoprecipitatie
Immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie zijn twee soorten op precipitatiereactie gebaseerde technieken die afhankelijk zijn van antigeen-antilichaam-interactie. De immunoprecipitatietechniek precipiteert een eiwit uit de oplossing met behulp van een specifiek antilichaam, terwijl de co-immunoprecipitatietechniek intacte eiwitcomplexen uit de oplossing precipiteert met behulp van een specifiek antilichaam. Dit vat dus het verschil samen tussen immunoprecipitatie en co-immunoprecipitatie.
