Het belangrijkste verschil tussen DNA- en RNA-isolatie is dat DNA-isolatie een procedure is waarbij een type nucleïnezuur genaamd DNA wordt geëxtraheerd uit een biologische cel, terwijl RNA-isolatie een procedure is waarbij een type nucleïnezuur genaamd RNA wordt geëxtraheerd uit een biologische cel.
Nucleïnezuurisolatie is het startpunt in een breed scala aan downstream-toepassingen. De hoge kwaliteit van nucleïnezuren in de uitgangsmonsters is een sleutelfactor voor het succes van daaropvolgende downstream-toepassingen. Nucleïnezuurisolatie zou kunnen worden gedefinieerd als een reeks stappen om nucleïnezuur te verkrijgen in een zuiverheidsmonster dat kan worden gebruikt voor verschillende stroomafwaartse toepassingsstappen. Het doel van nucleïnezuurextractie is om het celmembraan te desintegreren en de maximale eliminatie van lipiden en eiwitten te bereiken om zuivere nucleïnezuren zoals DNA of RNA te verkrijgen.
Wat is DNA-isolatie?
DNA-isolatie is een routineprocedure waarbij een type nucleïnezuur dat DNA wordt genoemd, wordt geëxtraheerd uit een biologische cel. DNA-isolatie wordt uitgevoerd door DNA te extraheren uit bloed, bevroren weefselmonsters en paraffineweefselblokken. Er zijn drie hoofdstappen bij DNA-isolatie, waaronder cellysis, DNA-extractie en precipitatie. Bij cellysis worden de cellen in een monster vaak van elkaar gescheiden door fysieke middelen zoals malen of vortexen en in een zouthoudende oplossing gebracht. Gewoonlijk helpen de positief geladen natriumionen in het zout de negatief geladen fosfaatgroepen die langs de ruggengraat van het DNA lopen te beschermen. Later wordt een detergens toegevoegd om de lipiden in het celmembraan en de kernen af te breken, die DNA vrijgeven als deze membranen worden verbroken.
Figuur 01: DNA-isolatie
DNA-extractie wordt uitgevoerd om een schoon DNA-monster te krijgen. Vaak wordt een protease-enzym toegevoegd om DNA-geassocieerde eiwitten en andere cellulaire eiwitten af te breken. Bovendien kan een deel van het celafval worden verwijderd door het monster te filteren. Ten slotte wordt het DNA geprecipiteerd met behulp van alcohol. Bovendien, als er veel DNA is, kan aan het einde van de procedure een gierig wit neerslag worden waargenomen.
Wat is RNA-isolatie?
RNA-isolatie is een procedure waarbij een type nucleïnezuur, RNA genaamd, wordt geëxtraheerd uit een biologische cel. Deze procedure wordt vaak gecompliceerd door de aanwezigheid van ribonuclease-enzymen in cellen en weefsels die RNA afbreken. In de moleculaire biologie worden verschillende methoden gebruikt om RNA uit monsters te isoleren, zoals extractie met guanidinium-thiocyanaat-fenol-chloroform.
Figuur 02: RNA-isolatie
RNA-isolatie bestaat meestal uit verschillende stappen, waaronder cellysis en homogenisatie, blussen van biochemische processen, nucleïnezuurpartitionering, RNA-winning, ruwe zuivering en beoordeling van de kwaliteit van RNA. De op filterpapier gebaseerde lysis- en elutiemethode heeft een hoge doorvoercapaciteit bij RNA-extractie. Bovendien is RNA-extractie in vloeibare stikstof met behulp van een vijzel en stamper ook een zeer bruikbare methode omdat het ribonuclease-activiteit voorkomt.
Wat zijn de overeenkomsten tussen DNA- en RNA-isolatie?
- DNA- en RNA-isolatie zijn twee soorten nucleïnezuurisolatieprocedures.
- Beide procedures hebben vergelijkbare basisstappen, zoals cellysis, extractie en zuivering.
- Deze procedures isoleren belangrijke nucleïnezuurtypen die een aantal downstream-toepassingen hebben.
- Ze worden uitgevoerd in laboratoriumopstellingen.
- Ze kunnen worden uitgevoerd met gefabriceerde kits.
Wat is het verschil tussen DNA- en RNA-isolatie?
Bij DNA-isolatie wordt een type nucleïnezuur dat DNA wordt genoemd, geëxtraheerd uit een biologische cel, terwijl bij RNA-isolatie een type nucleïnezuur dat RNA wordt genoemd, wordt geëxtraheerd uit een biologische cel. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen DNA- en RNA-isolatie. Bovendien wordt de DNA-isolatie normaal gesproken uitgevoerd bij een pH van ongeveer 7 tot 8, terwijl de RNA-isolatie normaal wordt uitgevoerd bij een pH van ongeveer 4,5.
De onderstaande infographic presenteert de verschillen tussen DNA- en RNA-isolatie in tabelvorm voor vergelijking naast elkaar.
Samenvatting – DNA versus RNA-isolatie
DNA- en RNA-isolatie zijn twee soorten nucleïnezuurisolatieprocedures. DNA-isolatie is een procedure waarbij DNA wordt geëxtraheerd uit een biologische cel. RNA-isolatie is een procedure waarbij RNA wordt geëxtraheerd uit een biologische cel. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen DNA- en RNA-isolatie.
