Belangrijk verschil – YAC versus BAC-vectoren
Vectors worden gebruikt bij moleculair klonen. Een vector kan worden gedefinieerd als een DNA-molecuul dat zich gedraagt als een vehikel om vreemd genetisch materiaal naar een andere cel te transporteren. Een vector die vreemd DNA bevat, staat bekend als recombinant DNA en zou het vermogen moeten hebben om het te repliceren en tot expressie te brengen in het gastheerorganisme. Gist kunstmatig chromosoom (YAC) en bacterieel kunstmatig chromosoom (BAC) zijn twee soorten vectoren die betrokken zijn bij klonen. Het belangrijkste verschil tussen YAC en BAC is dat YAC een kunstmatig geconstrueerd vectorsysteem is dat een specifiek gebied van gistchromosoom gebruikt om grote segmenten van genetisch materiaal in gistcellen in te voegen, terwijl BAC een kunstmatig geconstrueerd vectorsysteem is dat een specifiek gebied van E.coli-chromosoom om grote DNA-segmenten in E. coli-cellen in te voegen.
Wat zijn YAC-vectoren?
YAC (gist kunstmatig chromosoom) is een kunstmatig gebouwd chromosoom dat het vermogen heeft om een groot segment vreemd DNA te dragen en te repliceren in de gistcellen. Het heeft een centromeer, telomeren en autonoom replicerende sequenties die essentieel zijn voor replicatie en stabiliteit. YAC zou ook een selectieve marker of markers en restrictieplaatsen moeten dragen om er een effectieve kloneringsvector van te maken. Een grote sequentie variërend van 1000 kb tot 2000 kb kan in YAC worden ingevoegd en in gist worden overgebracht. De transformatie-efficiëntie van YAC is erg laag.
Figuur 01: YAC Vector
Wat zijn BAC-vectoren?
Bacterieel kunstmatig chromosoom (BAC) is een kunstmatig geconstrueerd chromosoom voor moleculair klonen. Het heeft specifieke regio's van E. coli F-plasmide en het is cirkelvormig en super opgerold. BAC is ontwikkeld om DNA-fragmenten te klonen naar bacteriën, vooral naar E. coli. Het kan DNA-fragmenten dragen met een grootte tot 300 kb. Vergeleken met YAC zijn BAC-kloneringsinserts kleiner van formaat. BAC's werden in 1992 ontwikkeld en zijn nog steeds populair vanwege de stabiliteit en het gemak van constructie. BAC's zijn ook nuttig bij het ontwikkelen van vaccins.
Figuur 02: BAC Vector bij moleculair klonen
Wat is het verschil tussen YAC- en BAC-vectoren?
YAC versus BAC-vectoren |
|
| YAC is een genetisch gemanipuleerd chromosoom met het gebruik van gist-DNA voor het klonen. | BAC is een genetisch gemanipuleerd DNA-molecuul dat E. coli-DNA gebruikt om te klonen. |
| Geslacht | |
| YAC's zijn ontworpen om grote fragmenten van genomisch DNA in gist te klonen. | BAC's zijn ontwikkeld voor het klonen van grote genomische fragmenten in Escherichia coli. |
| Lengte invoegen | |
| YAC's kunnen genomische inserts van megabase-formaat bevatten. (1000 kb – 2000 kb). | BAC's kunnen inserts van 200-300 kb of minder dragen. |
| Bouw | |
| YAC-DNA is moeilijk intact te zuiveren en vereist een hoge concentratie voor het genereren van een YAC-vectorsysteem. | BAC is gemakkelijk intact te zuiveren en kan gemakkelijk worden geconstrueerd. |
| Chimerisme | |
| YAC's zijn vaak chimerisch. | BAC's zijn zelden chimerisch. |
| Stabiliteit | |
| YAC is onstabiel. | BAC is stabiel. |
| Modificaties | |
| Gistrecombinatie is zeer goed mogelijk en blijft altijd actief. Daarom kan het verwijderingen en andere herschikkingen in een YAC genereren. | E. coli-recombinatie wordt voorkomen en wordt indien nodig ingeschakeld. Daarom vermindert het de ongewenste herschikkingen in BAC's. |
| Onderhoud | |
| Het manipuleren van recombinante YAC's vereist meestal dat YAC wordt overgebracht naar E. coli voor daaropvolgende manipulatie. Daarom is het een moeizaam proces. | BAC-modificatie vindt direct plaats in E. coli. Er is dus geen DNA-overdracht nodig. Daarom is het proces niet arbeidsintensief. |
Samenvatting – YAC vs BAC Vectors
YAC is een essentieel onderzoeksinstrument geworden in kloneringsprocessen vanwege het vermogen om grote DNA-fragmenten in het gastheerorganisme te klonen. YAC's hebben echter verschillende nadelen als vectoren, zoals constructieproblemen, chimerisme, instabiliteit, enz. Om deze problemen te overwinnen, hebben wetenschappers BAC-vectoren ontwikkeld. BAC is geconstrueerd met behulp van specifieke regio's van het E. coli-chromosoom. Het is een stabiele vector en kan gemakkelijk worden geconstrueerd. De lengte van DNA die BAC aankan, is echter tot 20 keer minder dan die van YAC. Dit is het verschil tussen YAC- en BAC-vectorsystemen. Tegenwoordig heeft BAC meer de voorkeur boven YAC in de laboratoria.
