Het belangrijkste verschil tussen Elisa en Elispot is dat Elisa een enzymgekoppelde immunosorbenstest is die de totale concentratie van uitgescheiden signaaleiwitten bepa alt, terwijl Elispot een enzymgekoppelde immunosorbenstest is die individuele cytokine-afscheidende cellen detecteert.
Elisa en Elispot zijn twee enzym-gekoppelde immunosorbent-assays die veel worden gebruikt in de geneeskunde, plantenpathologie, biotechnologie en verschillende farmaceutische industrieën. Bij deze technieken wordt een eiwitanalyt gedetecteerd door een daartegen gericht antilichaam. Elisa is de meest populaire enzymgebonden immunosorbenstest die in laboratoria wordt gebruikt. Aan de andere kant is Elispot een enzymgebonden immunosorbenstest die niet wordt gebruikt in plaats van Elisa, maar eerder naast Elisa in laboratoria.
Wat is Elisa-assay?
Elisa is een enzymgebonden immunosorbenstest die de totale concentratie van uitgescheiden signaaleiwitten bepa alt. Het is een veelgebruikte analytische biochemische test die voor het eerst werd beschreven door Engvall en Perlmann in 1971. Deze techniek maakt gebruik van een enzymimmunoassay van het type vaste fase om de aanwezigheid van een specifiek eiwit in een vloeibaar monster te detecteren met behulp van antilichamen die gericht zijn tegen dit specifieke eiwit. Deze test is een veelgebruikt diagnostisch hulpmiddel in de geneeskunde, plantenpathologie en biotechnologie.
Mechanisme van ELISA-test
In de meeste ELISA-tests wordt in het begin een onbekende hoeveelheid antigeen op een vaste drager (microliterplaat) geïmmobiliseerd. Vervolgens wordt het overeenkomende primaire antilichaam op het vaste drageroppervlak aangebracht. Dit antilichaam vormt een complex met het antigeen (antigeen-antilichaamcomplex). Het aan antigeen gebonden primaire antilichaam kan worden gedetecteerd door een secundair antilichaam dat via bioconjugatie aan een enzym is gekoppeld. In de laatste stap van de Elisa-test wordt een stof toegevoegd die het substraat van het enzym bevat. Als er een goede binding van een primair antilichaam aan het antigeen is, wordt een detecteerbare kleurverandering door het substraat geproduceerd. Uiteindelijk kwantificeert dit het antigeen in het monster.
Figuur 01: Verschillende soorten Elisa
Verder zijn er verschillende benaderingen van Elisa, zoals directe Elisa en indirecte Elisa. Momenteel worden verschillende Elisa-tests gebruikt om menselijke pathogenen zoals Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatitis B-virus, hepatitis C-virus, enterotoxine producerende E.coli, HIV en SARS-CoV-2 te detecteren.
Wat is Elispot-assay?
Elispot is een enzymgebonden immunosorbenstest die individuele cytokine-afscheidende cellen detecteert. Cecil Czerkinsky beschreef ELISpot voor het eerst in 1983. Het is een type test dat zich richt op het kwantitatief meten van de frequentie van cytokinesecretie voor een enkele cel. Het is ook geclassificeerd als een techniek die antilichamen gebruikt om een biologische of chemische eiwitanalyt te detecteren. Fluorospot-assay is een variatie op de Elispot-assay, die fluorescentie gebruikt om meerdere analyten (meer geheime eiwitten) te analyseren.
Mechanisme van Elispot-test
In dit mechanisme worden aanvankelijk cytokine-specifieke monoklonale antilichamen toegevoegd aan de putjes van microliterplaten. Vervolgens worden de gewenste cellen die worden waargenomen, aan de putjes toegevoegd. Later worden de cellen geïncubeerd. Tijdens de celincubatie mogen de cellen reageren op alle stimuli en cytokine afscheiden. De cytokinen die door de geïncubeerde cellen zijn uitgescheiden, zullen zich aan de antilichamen hechten, aangezien de cellen worden omgeven door cytokine-specifieke monoklonale antilichamen.
Figuur 02: Elispot-assay
Om deze cytokine-specifieke monoklonale antilichamen te detecteren, worden gebiotinyleerde specifieke detectie-antilichamen aan het putje toegevoegd. Gebiotinyleerde specifieke detectie-antilichamen vangen de cytokine-specifieke monoklonale antilichamen in de putjes. Bovendien worden streptavidine-enzymconjugaten aan de putjes toegevoegd om te binden met de detectie-antilichamen. In de laatste stap worden specifieke substraten aan de putjes toegevoegd. De reacties van enzymconjugaten en substraten produceren duidelijke vlekken in de putjes. Deze verschillende plekken worden uitgelezen op een geautomatiseerde ELISpot-lezer. Uiteindelijk zal dit de frequentie van cytokinesecretie verder berekenen.
Wat zijn de overeenkomsten tussen Elisa en Elispot?
- Het zijn beide enzym-gekoppelde immunosorbent-assays.
- Beide testen detecteren specifieke eiwitanalyten.
- Deze testen gebruiken specifieke antilichamen om de eiwitanalyten te identificeren.
- Beide testen gebruiken enzymen en substraten.
- Ze worden gebruikt als diagnostisch hulpmiddel in medische laboratoria.
Wat is het verschil tussen Elisa en Elispot?
Elisa is een enzymgebonden immunosorbenstest die de totale concentratie van uitgescheiden signaaleiwitten bepa alt. Aan de andere kant is Elispot een enzymgebonden immunosorbenstest die individuele cytokine-uitscheidende cellen meet. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen Elisa en Elispot. Bovendien wordt bij de Elisa-test het antigeen eerst op de microliterputjes geïmmobiliseerd. In de Elispot-test daarentegen wordt het antilichaam eerst op de microliterputjes geïmmobiliseerd. Dit is dus een ander verschil tussen Elisa en Elispot.
De onderstaande infographic geeft een gedetailleerde analyse van het verschil tussen Elisa en Elispot in tabelvorm.
Samenvatting – Elisa vs Elispot
Elisa en Elispot zijn twee enzymgebonden immunosorbenstests die veel worden gebruikt in de geneeskunde, plantenpathologie, biotechnologie en verschillende farmaceutische industrieën. Elisa detecteert de aanwezigheid van een ligand (eiwit) in een vloeibaar monster met behulp van antilichamen gericht tegen het te meten ligand. Elispot-assay is een veelgebruikte methode voor het volgen van immuunresponsen. Het detecteert individuele cytokine-uitscheidende cellen met behulp van antilichamen. Het is zowel een immunoassay als een bioassaytechniek. Dit is dus de samenvatting van het verschil tussen Elisa en Elispot.
