Het belangrijkste verschil tussen radioimmunoassay en immunoradiometrische assay is dat bij radioimmunoassay het te meten monster of de te meten verbinding wordt gecombineerd met een radioactief antigeen vóór de combinatie, terwijl bij de immunoradiometrische assay het monster of de verbinding onmiddellijk wordt gecombineerd met het radioactief gelabelde antilichamen.
Een immunoassay is een biochemische test die de aanwezigheid of concentratie van macromoleculen in een oplossing detecteert met behulp van een antilichaam of antigeen. Fluorescerende en radioactieve antilichamen worden gebruikt om antigenen in een monster te meten. Aanvankelijk werden antilichamen gebruikt in precipitatietechnieken zoals immunoprecipitatie, immunodiffusie en immuunelektroforese voor serumeiwitanalyse. Op dit moment worden zeer gevoelige technieken zoals radioimmunoassay en immunoradiometrische assays gebruikt voor het meten van medicijnen, tumormarkers en hormonen.
Wat is een radio-immunoassay?
Radioimmunoassay (RIA) is een immunoassay die gebruik maakt van stapsgewijze vorming van antigeen-antilichaamcomplexen van radioactieve elementen. RIA gebruikt meestal radioactieve antilichamen om de hoeveelheid antigeen in een monster te detecteren. RIA is een zeer specifieke en zeer gevoelige in vitro test. Het principe achter RIA is competitief bindend. Hier concurreert een radioactief antigeen met een niet-radioactief antigeen voor een constante hoeveelheid antilichaam- of receptorbindingsplaatsen. RIA vereist speciale vergunningen en voorzorgsmaatregelen aangezien radioactieve stoffen worden gebruikt, en het blijft een van de minst dure technieken.
Figuur 01: Immunoassay
Tijdens RIA wordt een bekende hoeveelheid antigeen vaak radioactief gemaakt door het te labelen met gamma-radioactieve isotopen van jodium gehecht aan tyrosine. Vervolgens wordt dit antigeen gecombineerd met een bekende hoeveelheid antilichaam. Hier binden zowel antigeen als antilichaam specifiek aan elkaar. Vervolgens wordt een bloedserummonster toegevoegd om een competitieve reactie te initiëren tussen de gelabelde antigenen en ongelabelde antigenen in het serum met specifieke antilichamen. Bij deze reactie geven antilichamen een bepaalde hoeveelheid gelabeld antigeen af. Deze hoeveelheid is evenredig met de verhouding van gelabeld tot ongelabeld antigeen. Ten slotte wordt een bindingscurve gegenereerd om de hoeveelheid antigeen in het bloedserum van een patiënt af te leiden.
Wat is een immunoradiometrische test?
Immunoradiometrische assay (IRMA) is een immunoassay die gebruik maakt van radioactief gelabelde antilichamen. In IRMA worden de antilichamen gelabeld met behulp van radio-isotopen. Deze antilichamen binden aan de antigenen die in een specifiek monster aanwezig zijn. In een positief monster binden antilichamen die radioactief zijn gelabeld aan de vrije epitopen van antigenen. Dit vormt een antigeen-antilichaamcomplex.
Tijdens de tweede reactie worden de gelabelde antilichamen die ongebonden zijn verwijderd met behulp van een vaste fase antigeen. Het resterende aantal radioactieve antilichamen in de oplossing is een directe functie van de antigeenconcentratie. IRMA staat bekend als een overmaat reagens-assay waarbij een overmaat aan radioactief gemerkt antilichaam als reagens wordt gebruikt. Hier laat men een overmatige concentratie van gemerkt antilichaam of antigeen reageren. Als laatste stap worden de aan antigeen gebonden en vrije antilichamen gescheiden en wordt de aan antigeen gebonden fractie onderworpen aan radioactieve testen. Hier is de activiteit van de fractie recht evenredig met de concentratie van het antigeen.
Wat zijn de overeenkomsten tussen radioimmunoassay en immunoradiometrische assay?
- Zowel radio-immunoassay als immunoradiometrische assay zijn immunoassays die radioactieve elementen gebruiken bij de stapsgewijze vorming van antigeen-antilichaamcomplexen.
- Ze vormen een antigeen-antilichaamcomplex.
Wat is het verschil tussen radio-immunoassay en immunoradiometrische assay?
Radioimmunoassay is een immunoassay die antilichaamniveaus bepa alt door een antigeen dat is gelabeld met een radio-isotoop, terwijl immunoradiometrische assay een overmaat reagensassay is die een overmatige concentratie van radioactief gemerkt antilichaam gebruikt. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen radio-immunoassay en immunoradiometrische assay. IRMA kan een hogere gevoeligheid bieden dan RIA. In RIA worden antigenen gelabeld met gamma-radioactieve isotopen van jodium, terwijl in IRMA antilichamen worden gelabeld met isotopen van jodium. Dit is dus ook een verschil tussen radioimmunoassay en immunoradiometrische assay. Aangezien IRMA een techniek met overtollig reagens is, wordt de test in een kortere tijd uitgevoerd dan RIA.
De volgende tabel geeft een overzicht van de verschillen tussen radioimmunoassay en immunoradiometrische assay.
Samenvatting – Radioimmunoassay vs Immunoradiometrische Assay
Radioimmunoassay is een immunoassay die radioactieve elementen in stapsgewijze vorming gebruikt om antilichaamniveaus te bepalen. RIA maakt meestal gebruik van radioactieve antilichamen. Een radioactief antigeen concurreert met een niet-radioactief antigeen voor een constante hoeveelheid antilichaam- of receptorbindingsplaatsen. De immunoradiometrische test is een immunotest die wordt uitgevoerd om antigeenniveaus van een monster te bepalen met behulp van radioactief gemerkte antilichamen. Deze antilichamen binden aan antigenen die in een specifiek monster aanwezig zijn. Aan het einde van elke test wordt een antigeen-antilichaamcomplex gevormd. Om de resultaten van de testen te verkrijgen, wordt een bindingscurve getekend. Bij radio-immunoassay is de hoeveelheid gelabeld antigeen evenredig met de verhouding van gelabeld tot niet-gelabeld antigeen, maar in een immunoradiometrische test is de activiteit van de aan antigeen gebonden fractie direct evenredig met de concentratie van het antigeen. Dit is de samenvatting van het verschil tussen radioimmunoassay en immunoradiometrische assay.
