Het belangrijkste verschil tussen colorimetrische en fluorometrische analyse is dat colorimetrische analyse de concentratie van gekleurde verbindingen in een oplossing bepa alt, terwijl fluorometrische analyse het kinetische mechanisme van een oplossing bepa alt.
Een biochemische test is een techniek die de activiteit van een biologisch molecuul of een biologische stof analytisch detecteert of kwantificeert. Het is een in vitro proces. Colorimetrische test en fluorometrische test zijn twee soorten algemene biochemische testen die in laboratoria worden uitgevoerd. Meerdere technieken zoals ELISA en western blotting zijn ook complexe biochemische testen voor de kwantificering van metabole activiteit en meting van het functionele gedrag van biomoleculen zoals eiwitten, enzymen en andere kleine moleculen. Dit soort tests worden gebruikt voor de identificatie van eiwit-DNA-, eiwit-RNA- en eiwit-eiwitinteracties.
Wat is een colorimetrische test?
Een colorimetrische test is een techniek die de concentratie van gekleurde verbindingen in een oplossing bepa alt. Met andere woorden, colorimetrische test is een reactie die leidt tot een kleurverandering als gevolg van een enzymatische of chemische reactie tussen reagentia en analyten. Colorimetrische testen worden in de biochemie toegepast om te testen op enzymen, specifieke verbindingen, hormonen, antilichamen en andere analyten. Ze gebruiken colorimeters of spectrofotometers. Colorimeters zijn instrumenten die gekleurde monsters karakteriseren om een objectieve maatstaf voor kleurkenmerken te bieden. Een spectrofotometer is een apparaat dat de lichtintensiteit meet als functie van de kleur of golflengte van het licht.
Figuur 01: Colorimetrische test
Hoe werkt een colorimetrische test?
In een colorimetrische test wordt een plaat bereid met een bepaald antilichaam gebonden aan putjes. Vervolgens wordt het monster toegevoegd. Hierdoor kan het monster aan het antilichaam binden. Vervolgens worden een detectie-antilichaam en een substraat aan de putjes toegevoegd om met de detectieprobe te reageren. Stopoplossing wordt aan het einde voor de meting toegevoegd. Een lege put, de blanco genaamd, wordt zonder het monster gelaten. Bij de colorimetrische test geldt: hoe donkerder de kleur, hoe groter de analytconcentratie. Gewoonlijk is slechts één golflengte nodig om de meting te doen. Maar als er een referentiemeting is, worden twee of meer golflengten gebruikt.
Wat is een fluorometrische test?
De fluorometrische test is een techniek die het kinetische mechanisme van enzymreacties bepa alt. Een fluorometrische test vindt plaats met vorming van een fluorescerend product uit een niet-fluorescerend substraat of vice versa. Deze test maakt ook gebruik van fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET), waarbij de enzymatische reactie de positie van twee fluoroforen in het substraat verandert, waardoor de fluorescentie-intensiteit verandert.
Figuur 02: Fluorometrische test
Fluorometrische testen zijn over het algemeen veel gevoeliger dan andere testen. De diagnostische enzymschattingen in weefsel-, cel- of vloeistofmonsters van patiënten nemen toe vanwege de hogere gevoeligheid.
Hoe werkt een fluorometrische test?
In een fluorometrische test wordt een substraat toegevoegd aan het monster in de plaat en wordt de fluorescentierespons genomen met behulp van de plaatlezer. Hier wordt elke cel afzonderlijk gemeten. Ondoorzichtige platen worden gebruikt in fluorometrische testen. Dit vermindert de verstrooiing van licht. Voor dit type test zijn twee golflengten nodig. Eén golflengte is om de excitatie te detecteren en de andere golflengte is voor de emissie.
Wat zijn de overeenkomsten tussen colorimetrische en fluorometrische analyse?
- Colorimetrische test en fluorometrische test zijn twee soorten biochemische testen.
- Beide testen worden uitgevoerd voor medische diagnostiek.
- Deze testen omvatten een enzymatische reactie.
- Beide testen hebben betrekking op een substraat en analyten.
Wat is het verschil tussen colorimetrische en fluorometrische analyse?
Een colorimetrische test is een techniek die de concentratie van gekleurde verbindingen in een oplossing bepa alt, terwijl een fluorometrische test een techniek is die het kinetische mechanisme van enzymreacties bepa alt. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen colorimetrische en fluorometrische test. Bovendien zijn de fluorometrische testen gevoeliger dan de colorimetrische testen; aldus hebben fluorometrische testen het vermogen om meer analyten te detecteren. Dit is dus een ander belangrijk verschil tussen colorimetrische en fluorometrische test. Bovendien vereisen fluorometrische tests twee golflengten, terwijl colorimetrische tests met één golflengte worden uitgevoerd.
De onderstaande infographic geeft meer verschillen weer tussen colorimetrische en fluorometrische analyse.
Samenvatting – Colorimetrische versus fluorometrische test
Een biochemische test is een analytisch proces dat wordt gebruikt om cellulaire metabolische reacties te bepalen en te kwantificeren. Colorimetrische test en fluorometrische test zijn twee soorten biochemische testen. Colorimetrische test is een reactie die leidt tot een kleurverandering als gevolg van een enzymatische of chemische reactie tussen reagentia en analyten, terwijl fluorometrische test een techniek is die wordt gebruikt om het kinetische mechanisme van enzymreacties te bepalen. Beide testen zijn afhankelijk van een enzymatische reactie waarbij een substraat en een analyt betrokken zijn. Fluorometrische testen zijn gevoeliger dan colorimetrische testen. Het belangrijkste is dat fluorometrische tests twee golflengten vereisen, terwijl colorimetrische tests met slechts één golflengte kunnen worden uitgevoerd. Dit vat dus het verschil samen tussen colorimetrische en fluorometrische analyse.
