Het belangrijkste verschil tussen BL21 en DH5 Alpha is dat BL21 een proteasedeficiënte genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel is die voornamelijk wordt gebruikt voor eiwitexpressie, terwijl DH5 Alpha een genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel is met recA1-mutatie die voornamelijk wordt gebruikt voor plasmidetransformatie.
E. coli is een van de beroemde organismen bij uitstek voor de productie van recombinante eiwitten. Het is in de loop der jaren het populairste expressieplatform geworden. Het wordt ook gebruikt als celfabriek. BL21 en DH5 Alpha zijn twee genetisch gemanipuleerde E. coli-cellen die momenteel worden gebruikt voor respectievelijk eiwitexpressie en plasmidetransformatie.
Wat is BL21?
BL21 is een proteasedeficiënte genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel die voornamelijk wordt gebruikt voor eiwitexpressie. E. coli BL21 is een bacteriële cel afgeleid van de B-stam. Het heeft defecten van Lon-protease en ompT-buitenmembraanprotease. Het wordt vaak gebruikt voor expressie van recombinante eiwitten, omdat het normaal gesproken stabiliteit geeft aan tot expressie gebrachte eiwitten. BL21 is bruikbaar voor eiwitexpressie met pCold I-IV DNA en pCold TF DNA. Maar deze competente E. coli-cel is niet bedoeld voor een eiwitexpressiesysteem dat gebruik maakt van een T7-promoter zoals een pET-systeem. De reden hierachter is dat BL21 geen T7-RNA-polymerase tot expressie brengt. Bovendien wordt het niet aanbevolen om het te gebruiken voor de constructie of bereiding van plasmide, aangezien het geen recA-mutatie heeft.
Figuur 01: BL21
BL21 werd voor het eerst beschreven door Studier in 1986 na verschillende aanpassingen van de B-lijn. BL21-cellen hebben een tekort aan het LON-protease, dat veel vreemde eiwitten afbreekt. Bovendien mist het een ander gen dat codeert voor het buitenmembraanprotease (OmpT) waarvan de functie is om extracellulaire eiwitten af te breken. Een gebrek aan deze eiwitten leidt tot de succesvolle productie van vreemd eiwit in E. coli BL21-cellen. Bovendien voorkomt hsdSB-mutatie in deze cellen vreemde DNA-methylatie en verstoring in de BL21-cellen.
Wat is DH5 Alpha?
DH5 Alpha is een genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel met recA1-mutatie die voornamelijk wordt gebruikt voor plasmidetransformatie. DH5 Alpha E. coli-cellen zijn genetisch gemanipuleerd door de Amerikaanse bioloog Douglas Hanahan om de efficiëntie van transformatie te maximaliseren. DH5 Alpha-cel heeft drie verschillende mutaties: recA1, endA1 en lacZΔM15. recA1 is een enkele puntmutatie die glycine 160 vervangt door en een asparaginezuurresidu in het recA-polypeptide. Deze mutatie schakelt de activiteit van de recombinasen uit en inactiveert homologe recombinatie. endA1-mutatie inactiveert een intracellulair endonuclease dat voorkomt dat het het ingevoegde plasmide afbreekt.
Figuur 02: DH5 Alpha
Bovendien maakt de lacZΔM15-mutatie een blauw-witte screening van getransformeerde cellen mogelijk. Deze cellen zijn competente cellen. Ze worden vaak gebruikt met calciumchloride-transformatie om het gewenste plasmide in te voegen. Door recent onderzoek werd vastgesteld dat de DH5 Alpha-cel met de Hanahan-methode de meest efficiënte competente cel was voor plasmidetransformatie.
Wat zijn de overeenkomsten tussen BL21 en DH5 Alpha?
- BL21 en DH5 Alpha zijn twee genetisch gemanipuleerde E.coli
- Beide zijn competente cellen.
- Ze bestaan uit verschillende mutaties.
- Beide hebben geen natuurlijke habitat.
- Deze worden gebruikt voor laboratoriumdoeleinden, zoals expressieonderzoeken en kloonprocedures.
Wat is het verschil tussen BL21 en DH5 Alpha?
BL21 is een proteasedeficiënte genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel die voornamelijk wordt gebruikt voor eiwitexpressie. Aan de andere kant is DH5 Alpha een genetisch gemanipuleerde competente E. coli-cel met recA1-mutatie die voornamelijk wordt gebruikt voor plasmidetransformatie. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen BL21 en DH5 Alpha. Bovendien heeft de BL21 E. coli-cel geen recA1-mutatie, terwijl de DH5 Alpha E. coli-cel wel een recA1-mutatie heeft.
De volgende infographic geeft een overzicht van de verschillen tussen BL21 en DH5 Alpha in tabelvorm.
Samenvatting – BL21 vs DH5 Alpha
De niet-pathogene stammen van E. coli zijn genetisch ontwikkeld door wetenschappers voor laboratoriumexpressiestudies en kloneringsdoeleinden. BL21 en DH5 Alpha zijn twee genetisch gemanipuleerde E. coli-cellen. BL21 wordt voornamelijk gebruikt voor eiwitexpressiestudies. Aan de andere kant wordt DH5 Alpha voornamelijk gebruikt voor plasmidetransformatiedoeleinden. Dit is dus de samenvatting van het verschil tussen BL21 en DH5 Alpha.
