Het belangrijkste verschil tussen Coomassie- en zilverkleuring is dat coomassie-kleuring een eiwitkleuringstechniek is die gebruikmaakt van een coomassie briljantblauwe kleuring, terwijl zilverkleuring een eiwitkleuringstechniek is waarbij een zilverkleuring wordt gebruikt.
Eiwitscheiding en identificatie zijn cruciale stappen in proteoomanalyse. Ze hebben eiwitkarakterisering met hoge resolutie nodig na gelelektroforese. Er zijn tal van kleurtechnieken die verschillende kleurstoffen omvatten, zoals anionische kleurstoffen (coomassie briljantblauw), metaalkationen (imidazol-zink), zilverkleuring en fluorescerende kleurstoffen, enz. Soms kunnen ook radioactieve sondes worden gebruikt. De keuze van de kleuringstechniek hangt af van de eenvoud, de beschikbaarheid van beeldvormingsapparatuur in het laboratorium, enz.
Wat is Coomassie-kleuring?
Coomassie-kleuring is een eiwitkleuringstechniek waarbij gebruik wordt gemaakt van een briljantblauwe coomassie-kleuring. Het wordt over het algemeen de coomassie-blauwe techniek genoemd. Coomassie briljantblauw is de meest populaire anionische eiwitkleurstof. Deze kleuring kleurt normaal gesproken bijna alle eiwitten met een goede kwantitatieve lineariteit bij gemiddelde gevoeligheid. Coomassie briljante blauwe kleuring bindt niet-specifiek aan bijna alle eiwitten. Er zijn twee verschillende varianten van Coomassie Brilliant Blue-beits: R-250 en G-250. R-250 biedt kortere kleurtijden, terwijl G-250 verkrijgbaar is in gevoeligere en milieuvriendelijkere formuleringen.
Figuur 01: Coomassie-kleuring
Coomassie-kleurstoffen zijn erg populair in massaspectrometriestudies en eiwitidentificatiestudies. Bovendien is bioveilige coomassie-kleuring een ongevaarlijke formulering van coomassie blue G-250 die momenteel op de markt verkrijgbaar is. Het voordeel van deze formulering is dat er alleen water nodig is voor het spoelen en ontkleuren. Bioveilige coomassie-kleuring biedt een gevoeligheid die gelijk is aan die van conventionele coomassie blue G-250, maar beter dan coomassie-kleuring R-250. Bovendien heeft het een eenvoudiger en sneller kleuringsprotocol dan de conventionele Coomassie Blue G-250. Het nadeel van coomassie-blauwkleuring is dat het minder gevoelig is in vergelijking met zilverkleuring. Coomassie-blauwkleuring is ongeveer 50 keer minder gevoelig dan zilverkleuring. Vanwege de eenvoud van binden heeft het echter de voorkeur in veel onderzoeken.
Wat is zilverkleuring?
Zilverkleuring is een eiwitkleuringstechniek waarbij een zilverkleuring wordt gebruikt. Zilverkleuring wordt gebruikt om zowel agarose- als polyacrylamidegels te kleuren. De zilverkleuring van eiwit in agarosegels werd voor het eerst ontwikkeld in 1973 door Kerenyi en Gallyas. Later werd het aangepast voor eiwitten in polyacrylamidegels die worden gebruikt in SDS-PAGE. Momenteel wordt zilverkleuring ook gebruikt voor het kleuren van DNA of RNA. Om de gels te kleuren, worden de gels bij deze methode geïncubeerd met zilvernitraatoplossing. Zilverkleuring kleurt de plaatsen waar eiwitten aanwezig zijn van bruin tot zwart.
Figuur 02: Zilverkleuring
De intensiteit van de zilverkleuring hangt af van de primaire structuur van het eiwit. Bovendien kunnen de reinheid van de gebruikte vaten en de zuiverheid van de reagentia ook de kwaliteit van zilverkleuring beïnvloeden. Het nadeel van zilverkleuring is echter dat het niet alle eiwitten kan detecteren, vooral glycoproteïnen en eiwitten met grote gemodificeerde groepen aan hun zijketens.
Wat zijn de overeenkomsten tussen Coomassie en zilverkleuring?
- Coomassie en zilverkleuring zijn twee technieken die worden gebruikt bij eiwitkleuring.
- Ze kunnen zowel eiwitten als DNA kleuren.
- Beide kleurtechnieken hebben nadelen.
- Deze technieken hebben vergelijkbare stappen, zoals fixeren, kleuren en ontkleuren.
Wat is het verschil tussen Coomassie en zilverkleuring?
Coomassie-kleuring is een eiwitkleuringstechniek waarbij gebruik wordt gemaakt van Coomassie Brilliant Blue-kleuring, terwijl sliverkleuring een eiwitkleuringstechniek is waarbij zilverkleuring wordt gebruikt. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen Coomassie en zilverkleuring. Bovendien is Coomassie-kleuring minder gevoelig dan zilverkleuring.
De onderstaande infographic geeft een overzicht van de verschillen tussen Coomassie en zilverkleuring in tabelvorm voor vergelijking naast elkaar.
Samenvatting – Coomassie versus zilverkleuring
Om eiwitten te visualiseren, kan een eiwitspecifieke kleurstofbindende of kleurproducerende chemische reactie worden uitgevoerd. Dit wordt eiwitkleuring genoemd. Coomassie- en zilverkleuring zijn twee technieken die worden gebruikt bij eiwitkleuring. Coomassie-kleuringstechniek maakt gebruik van coomassie briljante blauwe vlek, terwijl zilverkleuring gebruikmaakt van zilvervlek. Dit is dus het belangrijkste verschil tussen Coomassie en zilverkleuring.
