Belangrijk verschil – Flowcytometrie versus FACS
In de context van de celtheorie zijn cellen de structurele en functionele basiseenheid van alle levende organismen. Celsortering is een methode die wordt gebruikt om verschillende cellen te scheiden op basis van de fysiologische en morfologische kenmerken. Ze kunnen intracellulaire of extracellulaire kenmerken hebben. Interactie van DNA, RNA en eiwitten worden beschouwd als intracellulaire interactieve eigenschappen, terwijl de vorm, grootte en verschillende oppervlakte-eiwitten worden beschouwd als extracellulaire eigenschappen. In de hedendaagse wetenschap hebben celsorteringsmethodologieën geleid tot ondersteuning van de verschillende onderzoeken in biologische studies en ook tot het vaststellen van nieuwe principes door middel van onderzoek naar medicijnen. Celsortering wordt uitgevoerd op verschillende methoden, waaronder zowel primitieve met minder apparatuur als geavanceerde technologische methoden met behulp van geavanceerde machines. Flowcytometrie, fluorescente geactiveerde celsortering (FACS), magnetische celselectie en enkele celsortering zijn de belangrijkste gebruikte methoden. Flowcytometrie en FACS zijn ontwikkeld om cellen te differentiëren op basis van hun optische eigenschappen. FACS is een gespecialiseerd type flowcytometrie. Flowcytometrie is een methodologie die wordt gebruikt tijdens de analyse van een heterogene populatie van cellen volgens verschillende celoppervlaktemoleculen, grootte en volume, die het onderzoek van afzonderlijke cellen mogelijk maakt. FACS is een proces waarbij een monstermengsel van cellen wordt gesorteerd op basis van hun lichtverstrooiings- en fluorescentiekenmerken in twee of meer containers. Dit is het belangrijkste verschil tussen flowcytometrie en FACS.
Wat is flowcytometrie?
Flowcytometrie is een methode die wordt gebruikt om de expressie van intracellulaire moleculen en het celoppervlak te onderzoeken en te bepalen en om verschillende celtypen te definiëren en te karakteriseren. Het wordt ook gebruikt bij het bepalen van het celvolume en de celgrootte en om de zuiverheid van geïsoleerde subpopulaties te evalueren. Dit maakt de multi-parameter evaluatie van afzonderlijke cellen op ongeveer hetzelfde moment mogelijk. Flowcytometrie wordt gebruikt bij het meten van de intensiteit van fluorescentie die wordt geproduceerd door fluorescent gelabelde antilichamen die helpen bij het identificeren van eiwitten of liganden die binden aan geassocieerde cellen.
Figuur 01: Flowcytometrie
In het algemeen omvat flowcytometrie voornamelijk drie subsystemen. Dit zijn de fluidica, de elektronica en de optica. In flowcytometrie zijn vijf hoofdcomponenten beschikbaar die worden gebruikt bij celsortering. Ze zijn een stroomcel (een stroom vloeistof die wordt gebruikt om ze te transporteren en de cellen uit te lijnen voor optisch detectieproces), een meetsysteem (kan van verschillende systemen zijn, waaronder kwik- en xenonlampen, hoogvermogen watergekoelde of laagvermogen luchtgekoelde lasers of diodelasers), een ADC; Analoog naar digitaal convertersysteem, versterkingssysteem en een computer voor analyse. De acquisitie is het proces waarbij de gegevens uit de monsters worden verzameld met behulp van een flowcytometer. Dit proces wordt gemedieerd door een computer die is verbonden met de flowcytometer. De in de computer aanwezige software analyseert de informatie die vanuit de flowcytometer aan de computer wordt toegevoerd. De software heeft ook de mogelijkheid om parameters van het experiment aan te passen dat de flowcytometer bestuurt.
Wat is FACS?
In de context van flowcytometrie is Fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) een methode die wordt gebruikt bij het differentiëren en sorteren van een monster van een mengsel van biologische cellen. De cellen zijn gescheiden van twee of meer containers. De sorteermethode is gebaseerd op de fysieke kenmerken van de cel, waaronder lichtverstrooiing en fluorescentie-eigenschappen van de cel. Dit is een belangrijke wetenschappelijke techniek die kan worden gebruikt om betrouwbare kwantitatieve en kwalitatieve resultaten te verkrijgen van fluorescentiesignalen die door elke cel worden uitgezonden. Tijdens FACS, aanvankelijk, het vooraf verkregen mengsel van cellen; een suspensie wordt naar het midden van een smalle stroom vloeistof geleid die snel stroomt. De vloeistofstroom is ontworpen om de cellen in de suspensie te scheiden op basis van de diameter van elke cel. Een trillingsmechanisme wordt toegepast op de suspensiestroom, wat resulteert in de vorming van individuele druppeltjes.
Figuur 02: FACS
Het systeem is gekalibreerd om een enkele druppel met één cel te creëren. Net voor de vorming van druppeltjes beweegt de stroomsuspensie langs een fluorescentiemeetapparaat dat de fluorescentiekarakteristiek van elke cel detecteert. Op het punt van vorming van druppeltjes wordt een elektrische oplaadring geplaatst die een lading op de ring induceert voorafgaand aan de meting van de intensiteit van de fluorescentie. Zodra de druppeltjes zijn gevormd uit de suspensiestroom, wordt een lading gevangen in de druppeltjes die vervolgens in een elektrostatisch afbuigsysteem terechtkomen. Volgens de lading leidt het systeem de druppels naar verschillende containers. De wijze van toepassing van de heffing varieert afhankelijk van de verschillende systemen die in FACS worden gebruikt. De apparatuur die in FACS wordt gebruikt, staat bekend als een door fluorescentie geactiveerde celsorteerder.
Wat is de overeenkomst tussen flowcytometrie en FACS?
Flowcytometrie en FACS zijn ontwikkeld om cellen te differentiëren op basis van hun optische eigenschappen
Wat is het verschil tussen flowcytometrie en FACS?
Flow Cytometry vs FACS |
|
| Flowcytometrie is een methodologie die wordt gebruikt tijdens de analyse van een heterogene populatie van cellen volgens verschillende celoppervlaktemoleculen, grootte en volume, die het onderzoek van afzonderlijke cellen mogelijk maakt. | FACS is een proces waarbij een monstermengsel van cellen wordt gesorteerd op basis van hun lichtverstrooiing en fluorescentie-eigenschappen in twee of meer containers. |
Samenvatting – Flowcytometrie versus FACS
De cel is de fundamentele structurele en functionele eenheid van alle levende organismen. Celsortering is het proces waarbij cellen worden geïsoleerd en gedifferentieerd in verschillende categorieën op basis van hun intracellulaire en extracellulaire eigenschappen. Flowcytometrie en FACS zijn twee belangrijke methodologieën bij het sorteren van cellen. Beide processen zijn ontwikkeld om cellen te differentiëren op basis van hun optische eigenschappen. Flowcytometrie is een methodologie die wordt gebruikt tijdens de analyse van een heterogene populatie van cellen volgens verschillende celoppervlaktemoleculen, grootte en volume, die het onderzoek van afzonderlijke cellen mogelijk maakt. FACS is een proces waarbij een monstermengsel van cellen wordt gesorteerd op basis van hun lichtverstrooiings- en fluorescentiekenmerken in twee of meer containers. Dit is het verschil tussen flowcytometrie en FACS.
Download de PDF-versie van Flow Cytometry vs FACS
U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden volgens de citatienota. Download hier de PDF-versie. Verschil tussen flowcytometrie en FACS
