Het belangrijkste verschil tussen isocratische en gradiëntelutie is dat isocratische elutie verwijst naar het handhaven van een constante concentratie in de mobiele fase, terwijl gradiëntelutie verwijst naar het handhaven van een variërende concentratie in de mobiele fase.
De termen isocratisch en gradiëntelutie worden gebruikt in chromatografie. Tijdens een chromatografische run gebruiken we een stationaire fase, een niet-bewegende stof, samen met een mobiele fase, de bewegende stof. De isocratische en gradiëntelutie beschrijft de eigenschappen van de mobiele fase.
Wat is isocratische elutie?
Isocratische elutie is een term die wordt gebruikt in chromatografie wanneer de mobiele fase een constante concentratie heeft. Hier is de concentratie van de mobiele fase constant tijdens het chromatografische proces. In dit proces kunnen we de piekbreedte zien toenemen met de retentietijd lineair in het chromatogram. Dit leidt echter tot een nadeel: de laat-eluerende pieken voor late elutie worden erg vlak en breed. Daarom worden deze brede pieken moeilijk als pieken te herkennen.
Bovendien verandert de selectiviteit bij isocratische elutie niet volgens de kolomafmetingen. Dit betekent dat de selectiviteit niet afhankelijk is van de wijzigingen in kolomafmetingen. Hierbij worden lengte en diameter als kolomafmetingen beschouwd. Daarom elueren de pieken in dezelfde volgorde.
Wat is gradiëntelutie?
Gradient-elutie is een term die wordt gebruikt in chromatografie wanneer hier de mobiele fase een variërende concentratie heeft. Met andere woorden, de concentratie van de mobiele fase hoeft niet constant te blijven. In HPLC bijvoorbeeld, gebruikt een gebruikelijke scheidingsmethode aanvankelijk 10% methanol en eindigt bij 90%, door de concentratie geleidelijk te verhogen. De mobiele fase heeft twee componenten: een zwak oplosmiddel en een sterk oplosmiddel. Een zwak oplosmiddel zorgt ervoor dat de opgeloste stof langzaam elueert, terwijl een sterk oplosmiddel de snelle elutie van de opgeloste stof veroorzaakt. Bij omgekeerde-fasechromatografie gebruiken we water als het zwakke oplosmiddel en organisch oplosmiddel als het sterke oplosmiddel.
Figuur 01: HPLC
Bovendien vermindert de gradiëntelutiemethode de latere eluerende componenten om ze sneller te laten elueren, wat een smalle piek in het chromatogram oplevert. Deze methode verbetert ook de piekvorm en de piekhoogte. Bovendien verandert bij gradiëntelutietechniek de elutievolgorde met de veranderingen in kolomafmetingen.
Wat is het verschil tussen isocratische en gradiëntelutie?
De termen isocratisch en gradiëntelutie worden gebruikt in chromatografie. Isocratische en gradiëntelutie beschrijven de eigenschappen van de mobiele fase. Het belangrijkste verschil tussen isocratische en gradiëntelutie is dat isocratische elutie verwijst naar het handhaven van een constante concentratie in de mobiele fase, terwijl gradiëntelutie verwijst naar het handhaven van een variërende concentratie in de mobiele fase.
In de isocratische elutietechniek neemt de piekbreedte lineair toe met de retentietijd. Bij de gradiëntelutietechniek wordt de retentie van de later eluerende componenten echter verminderd, zodat de elutie sneller wordt en smalle pieken geeft. Afgezien daarvan is de selectiviteit bij de isocratische elutie niet afhankelijk van de kolomafmetingen, maar bij gradiëntelutie verandert de selectiviteit met veranderende kolomafmetingen.
De volgende tabel geeft een overzicht van het verschil tussen isocratische en gradiëntelutie.
Samenvatting – Isocratische vs gradiëntelutie
Isocratische elutie en gradiëntelutie beschrijven de eigenschappen van de mobiele fase. Het belangrijkste verschil tussen isocratische en gradiëntelutie is dat isocratische elutie verwijst naar het handhaven van een constante concentratie in de mobiele fase, terwijl gradiëntelutie verwijst naar het handhaven van een variërende concentratie in de mobiele fase.
