Het belangrijkste verschil tussen gelfiltratie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltratiechromatografie afhangt van de verschillen in molecuulgewicht of grootte van het analytmonster, terwijl affiniteitschromatografie afhangt van de affiniteit van een analyt voor een geïmmobiliseerde ligand.
De term chromatografie in de analytische chemie verwijst naar het proces van de scheiding van componenten in een mengsel met behulp van verschillende technieken. Chromatografie is een verzamelnaam die een groot aantal verschillende scheidingsmethoden vertegenwoordigt.
Wat is gelfiltratiechromatografie?
Gelfiltratiechromatografie is een analytische techniek waarbij de scheiding van componenten afhankelijk is van het verschil in molecuulgewicht of grootte. Deze techniek wordt ook wel size-exclusion chromatography of moleculaire zeefchromatografie genoemd. De scheidingstechniek in dit proces hangt af van het verschillende vermogen van moleculen in het monster om de poriën van het gelfiltratiemedium binnen te gaan.
Bij de gelfiltratietechniek bevat de stationaire fase parels van gehydrateerd, sponsachtig materiaal met poriën van moleculaire afmetingen die een smal bereik van grootten bevatten. Als we een waterige oplossing bestaande uit moleculen van verschillende groottes door een kolom leiden die deze "moleculaire zeven" bevat, bewegen de moleculen die groter zijn dan de poriën van het filtratiemedium snel door de kolom. Daarentegen komen de kleinere moleculen de poriën van de gel binnen en hebben ze de neiging langzaam door de kolom te bewegen. Moleculen elueren uit de kolom in volgorde van afnemende molecuulgrootte. Hier is de uitsluitingslimiet van de gel de molecuulmassa van de kleinste moleculen die niet in staat zijn de poriën van een bepaalde gel te penetreren.
Er zijn verschillende soorten gelfiltratietechnieken, zoals indirecte gelfiltratiemethode, steady-state gelfiltratie, gelpareldialyse, enz. Indirecte gelfiltratiechromatografie is nuttig bij de bepaling van vrije schildklierhormonen. Steady-state gelfiltratiechromatografie is een indirecte techniek die vooral nuttig is voor het meten van vrije steroïden zoals cortisol, testosteron, enz. Gelpareldialyse daarentegen is een wijziging van steady-state gelfiltratie die relatief eenvoudiger is.
Wat is affiniteitschromatografie?
Affiniteitschromatografie is een analytische techniek en een scheidingsmethode die afhankelijk is van een specifieke bindingsinteractie tussen een geïmmobiliseerde ligand en zijn bindingspartner. Enkele voorbeelden zijn antilichaam-antigeenbinding, enzym-substraatbinding en enzym-remmerbinding. Daarom heeft deze techniek veel belangrijke toepassingen bij nucleïnezuurzuivering, eiwitzuivering uit celextracten en zuivering uit bloed.
Bij deze techniek is de belangrijkste eigenschap ligandimmobilisatie. Hiervoor kunnen we verschillende materialen gebruiken zoals acrylaten en silicagel. Het is belangrijk om sterische interferentie van het doelmolecuul met het ligand te voorkomen. Bovendien is aan de vaste fase een remmer gehecht. We noemen deze remmer een spacer. Klassiek bestaat een spacer uit een koolwaterstofketen.
De stationaire fase van de affiniteitschromatografie bevat de kern, spacer en ligand. Soms heeft het ook een metaalion dat aan het ligand is gekoppeld. De vaste fase met de meeste voorkeur voor de stationaire fase bij deze techniek is agarosegel omdat het gemakkelijk kan worden gedoseerd om de kolom te vullen en te verpakken met harsbedden van elke grootte, en het is groot genoeg voor biomoleculen om vrij in en door de kralen te stromen. De liganden kunnen op verschillende manieren covalent aan het parelpolymeer hechten. De meest voorkomende spacerverbindingen zijn cyanogeenbromide, epoxide, epoxide met C6-zuur en diamine. Aan de andere kant verschilt het ligand dat we kunnen gebruiken afhankelijk van het doelwit, bijvoorbeeld antilichaam-antigeen, ijzer- of aluminiumionen-fosfoproteïnen, avidine-biotine, glutathion-GST, chelator-His-gelabelde eiwitten, enz.
Wat is het verschil tussen gelfiltratie en affiniteitschromatografie?
Chromatografie is een belangrijke analytische techniek. Gelfiltratiechromatografie en affiniteitschromatografie zijn twee belangrijke variaties van chromatografie. Het belangrijkste verschil tussen gelfiltratie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltratiechromatografie afhangt van de verschillen in molecuulgewicht of grootte van het analytmonster, terwijl affiniteitschromatografie afhangt van de affiniteit van een analyt voor een geïmmobiliseerde ligand.
Samenvatting – Gelfiltratie versus affiniteitschromatografie
Er zijn verschillende soorten chromatografische technieken afhankelijk van hun toepassing en de aard van het analytmonster. Gelfiltratie en affiniteitschromatografie zijn twee van dergelijke technieken. Het belangrijkste verschil tussen gelfiltratie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltratiechromatografie afhangt van de verschillen in molecuulgewicht of grootte van het analytmonster, terwijl affiniteitschromatografie afhangt van de affiniteit van een analyt voor een geïmmobiliseerde ligand.
